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喜樹堿類藥物通過接頭與具有低抗原結(jié)合親和力的抗體連接的抗體-藥物綴合物的制作方法

文檔序號(hào):42170295發(fā)布日期:2025-06-13 16:27閱讀:26來源:國知局
本發(fā)明涉及免疫綴合物或其藥學(xué)上可接受的鹽,其特征在于,降解ddx5蛋白的喜樹堿類藥物(a)通過接頭(c)與如下抗體或其含抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段結(jié)合:抗體或其含抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段(b-1),其對(duì)細(xì)胞表面蛋白的抗原表位的解離常數(shù)kd值(value)為1*10-8m以上且小于1*10-6m;或抗體或其含抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段(b-2),其與在正常細(xì)胞和癌細(xì)胞中均表達(dá)的細(xì)胞表面蛋白結(jié)合,當(dāng)以二價(jià)而不是一價(jià)結(jié)合細(xì)胞表面蛋白的抗原表位時(shí),結(jié)合親和力更高。
背景技術(shù)
::1、為了形成特定微觀結(jié)構(gòu)而排列和創(chuàng)建器官,從而各種細(xì)胞和基質(zhì)構(gòu)成物質(zhì)經(jīng)過進(jìn)化實(shí)現(xiàn)結(jié)構(gòu)、功效以及功能的優(yōu)化。小腸的上皮細(xì)胞膜或肌肉的肌肉細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞在發(fā)育過程中形成特定精細(xì)解剖結(jié)構(gòu),每個(gè)細(xì)胞即使在成年后也能維持組織或器官的穩(wěn)態(tài)。2、隨著癌癥的生長,周圍的正常組織和癌組織不斷動(dòng)態(tài)地發(fā)生結(jié)構(gòu)變化,穩(wěn)態(tài)被破壞。癌細(xì)胞的過度分裂、蛋白水解酶活性、基質(zhì)的生成等都會(huì)改變細(xì)胞-細(xì)胞或細(xì)胞-基質(zhì)關(guān)系并可能影響形態(tài)發(fā)生。眾所周知的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymaltransition,emt)可被認(rèn)為是細(xì)胞從僅在二維表面受影響的上皮狀態(tài)下被三維細(xì)胞外基質(zhì)包圍而轉(zhuǎn)變?yōu)闈B透間質(zhì)狀態(tài)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生變化的示例。3、喜樹堿(camptothecin)是1型拓?fù)洚悩?gòu)酶(topoisomerase-1)的選擇性抑制物,1型拓?fù)洚悩?gòu)酶(topoisomerase-1)是參與dna復(fù)制和重組等的異構(gòu)酶。它是天然的抗腫瘤生物堿,由美國的wall等人于1966年從原產(chǎn)于中國的喜樹(camptotheca?acuminata)中分離出來。自從發(fā)現(xiàn)在體外(in?vitro)示出強(qiáng)細(xì)胞毒性(cytotoxicity),美國國家癌癥研究中心(nci)等開始著手通過臨床試驗(yàn)的開發(fā),但由于溶解性極差的限制,與其相關(guān)的骨髓抑制和出血性膀胱炎等各種副作用,從而中斷了研究開發(fā)。但是,1990年后,喜樹堿所具有的獨(dú)特的作用機(jī)制,即與dna2型拓?fù)洚悩?gòu)酶(topoisomerase-2)抑制機(jī)制不同,選擇性地抑制dna1型拓?fù)洚悩?gòu)酶以示出抗腫瘤效果。4、dna拓?fù)洚悩?gòu)酶是旋轉(zhuǎn)酶(gyrase)酶組的一種。它們是細(xì)胞核中的酶,當(dāng)細(xì)胞需要接近遺傳物質(zhì)以進(jìn)行復(fù)制或轉(zhuǎn)錄時(shí),其具有暫時(shí)切割dna或解開雙螺旋的作用。它們還參與染色體凝聚和重組、以及dna修復(fù)等各種細(xì)胞內(nèi)活動(dòng)。拓?fù)洚悩?gòu)酶的遺傳密碼在物種間高度保守。5、據(jù)觀察,作為喜樹堿的藥物靶標(biāo)的1型拓?fù)洚悩?gòu)酶在各種惡性腫瘤中其水平提高。該藥物雖然不會(huì)抑制游離酶,但可使拓?fù)?dna復(fù)合物的共價(jià)鍵穩(wěn)定,以防止切割的dna片段重新連接。因此,細(xì)胞對(duì)這種拓?fù)洚悩?gòu)酶-對(duì)象藥物的敏感性與細(xì)胞核中存在的酶的水平有關(guān)。該藥物通過干擾dna的重組,以阻止轉(zhuǎn)錄的進(jìn)行。1型拓?fù)洚悩?gòu)酶的量越高,形成越多的可裂解復(fù)合物,這意味著藥物敏感性高。這具有重要的臨床相關(guān)性,1型拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制物用于增加2型拓?fù)洚悩?gòu)酶的表達(dá),使其對(duì)2型拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制物更敏感。1型拓?fù)洚悩?gòu)酶與2型拓?fù)洚悩?gòu)酶之間的對(duì)立關(guān)系支持這些結(jié)果。與2型拓?fù)洚悩?gòu)酶不同,在正常組織中這些1型拓?fù)洚悩?gòu)酶與增殖沒有密切關(guān)系,與周圍的正常組織相比,大量存在于細(xì)胞分裂活躍的“s”期的實(shí)體瘤中,例如包括淋巴瘤在內(nèi)的結(jié)腸癌、卵巢癌、食道癌等,實(shí)際上在細(xì)胞周期“s”期中,通過在腫瘤細(xì)胞內(nèi)阻斷基因的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄,從而可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡。6、喜樹堿(cpt)的水溶性較低,為了準(zhǔn)備臨床試驗(yàn),美國國家癌癥研究中心(nci)制備了水溶性鈉鹽(nsc100880)。由于所述化合物表現(xiàn)出高毒性(出血性膀胱炎、胃腸道毒性例如惡心、嘔吐、腹瀉和骨髓抑制,特別是白細(xì)胞減少和血小板減少),1期和2期臨床試驗(yàn)尚未完成。7、隨后,合成了許多喜樹堿(cpt)類似物,以得到毒性更低、水溶性更高的化合物。有兩種藥物,伊立替康(cpt-11)和拓?fù)涮婵怠?、伊立替康(irinotecan,cpt-11)由日本第一株式會(huì)社(dallchi)和養(yǎng)樂多(yakult)聯(lián)合開發(fā),是世界上第一個(gè)喜樹堿類抗癌藥物,于1994年被證明對(duì)肺癌(小細(xì)胞,非小細(xì)胞肺癌)的有效性,并在歐洲和日本上市,1995年其對(duì)抗結(jié)腸癌、乳腺癌的有效性又得到證實(shí)。另外,葛蘭素史克(glaxo?smith?kline)公司開發(fā)的拓?fù)涮婵?topotecan)于1995年4月被美國fda批準(zhǔn)轉(zhuǎn)移性卵巢癌的有效性并上市。ckd-602(belotecan)是韓國新近開發(fā)的一種新型喜樹堿衍生物,其具有很強(qiáng)的1型拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制效果,并且是水溶性的,成功克服了現(xiàn)有因溶解性差而導(dǎo)致的毒性。9、迄今為止確認(rèn)的所有喜樹堿衍生物含有具有細(xì)胞毒性所需的5個(gè)環(huán)的母體結(jié)構(gòu)(圖1)。就分子結(jié)構(gòu)而言,e環(huán)、a環(huán)、b環(huán)位點(diǎn)被確認(rèn)為重要位點(diǎn)。喜樹堿由在細(xì)胞毒性所需的e環(huán)中具有一個(gè)內(nèi)酯的五環(huán)結(jié)構(gòu)組成。其中,e環(huán)的c20位的內(nèi)酯基團(tuán)和α羥基對(duì)于1型拓?fù)洚悩?gòu)酶-dna副產(chǎn)物的穩(wěn)定性很重要,并且已證實(shí)a環(huán)及b環(huán)的修飾可以增加水溶性和活性。第一個(gè)環(huán)上的修飾已被證實(shí)為例如在所述提及的藥物的情況下增加水溶性并接受大于所述藥物的耐受性。10、ckd-602也嘗試取代c7的b環(huán)位點(diǎn),以增加水溶性和抗癌效果。據(jù)lee等人報(bào)道,與喜樹堿(camptothecin)和拓?fù)涮婵?topotecan)相比,ckd-602在多種癌細(xì)胞系中具有優(yōu)異的抗癌效果。另外,在l1210白血病裸鼠模型中確認(rèn)其是比較全的藥物,其最大耐受劑量(maximum?tolerated?dose,mtd)為25mg/kg。通常,已知的喜樹堿類藥物的副作用可大致分為血液學(xué)副作用和非血液學(xué)副作用。作為血液學(xué)副作用,具有伴隨發(fā)熱的中性粒細(xì)胞缺乏癥、敗血癥、出血等,作為非血液學(xué)副作用,可例舉皮膚副作用,例如惡心、嘔吐、脫發(fā)等,以及對(duì)胃腸道、腎臟、神經(jīng)系統(tǒng)的毒性。kim等人在ckd-602動(dòng)物研究中發(fā)現(xiàn),這些喜樹堿類藥物的副作用中,在比可臨床適用的劑量高10倍以上的高容量給藥的情況下也未發(fā)現(xiàn)除胃液分泌增加外的異常藥物反應(yīng)。此外,近期韓國國內(nèi)臨床研究中也證明了其相對(duì)安全性,并且僅報(bào)告了中性粒細(xì)胞缺乏癥和白細(xì)胞減少癥的可逆可控的水平的副作用,而并未報(bào)告嚴(yán)重的全身毒性。但是,迄今為止,主要適應(yīng)癥為標(biāo)準(zhǔn)化療法失敗或不能進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化療法的患者,即標(biāo)準(zhǔn)治療后復(fù)發(fā)或惡化且判斷為難以通過進(jìn)一步的抗癌化療、手術(shù)來獲得效果的耐藥性(refractory)或復(fù)發(fā)性(recurrent)卵巢癌和結(jié)腸癌的治療、初次化療失敗的耐藥性或復(fù)發(fā)性局限期(limited?disease)小細(xì)胞肺癌的治療、廣泛期(extensive?disease)小細(xì)胞肺癌的治療,并被限制性使用。11、sn-38是在各種細(xì)胞系中具有納摩爾范圍的ic50值的強(qiáng)效拓?fù)洚悩?gòu)酶-i抑制劑。其是用于結(jié)直腸癌治療的前藥伊立替康的活性形式,在肺癌、乳腺癌以及腦癌中也有活性。對(duì)于trop-2-sn-38adc,目前三陰性乳腺癌(tnbc)、膀胱癌(bladder)、胃癌(gastric?cancer)等多種癌癥類型中開發(fā)成功,但仍存在sn-38耐藥性問題(藥物外排轉(zhuǎn)運(yùn)體(drug?effluxtransporter)過表達(dá)、top1的表觀遺傳沉默(epigenetic?silencing?of?top1)、抗凋亡蛋白增加(anti-apoptic?protein?increase)等)。12、根據(jù)us9629926b,hrs7-cl2a-sn-38的體內(nèi)分布被與親本hrs7?igg相似的腫瘤吸收(tumor?uptake),但由于sn-38的疏水性,以高出兩倍的肝臟吸收快速除去。由于所述adc通過肝臟除去,預(yù)計(jì)肝臟和胃腸道毒性受到容量限制。13、喜樹堿類的衍生物,例如sn-38和dxd(臨床階段拓?fù)洚悩?gòu)酶i抑制物exatecan的衍生物),最近已成功開發(fā)為抗體-藥物綴合物(adc)的新型有效負(fù)載。其結(jié)果,兩種使用喜樹堿(camptothecin)有效負(fù)載的adc,即具有sn-38有效負(fù)載的戈沙妥珠單抗(商品名稱:戈沙妥珠單抗(trodelvy),sacituzumab?govitecan)和具有dxd有效負(fù)載的德曲妥珠單抗(商品名稱:enhertu,trastuzumab?deruxtecan),最近獲得fda批準(zhǔn)。與mmae、mmaf或pbd等現(xiàn)有超毒性(ultra-toxic)adc有效負(fù)載相比,這些有效負(fù)載具有中等程度的細(xì)胞毒性,但由于其優(yōu)異的安全性特征,可使用更高的藥物抗體比(dar),例如8,而不是現(xiàn)有adc中的2或4。另外,通過這些有效負(fù)載,可使用具有更快的藥物釋放特征的接頭系統(tǒng),例如cl-2a或ggfg接頭系統(tǒng)。這些成分的組合導(dǎo)致了具有更廣泛治療范圍的新型adc的開發(fā)。14、抗體-藥物綴合物(adc)是一種附著在抗體上的新型的新藥開發(fā)模式,該抗體可通過特殊結(jié)構(gòu)的接頭來選擇性地識(shí)別以少量也能有效抑制癌細(xì)胞的生長的強(qiáng)力抗癌藥物(有效負(fù)載)癌細(xì)胞。adc可通過抗體來向癌細(xì)胞選擇性地遞送具有強(qiáng)抗癌功效的藥物,因此無全身副作用的情況下顯示出強(qiáng)抗癌功效,但由于遞送的藥物量的限制,其效力也會(huì)受到限制。15、一般來說,當(dāng)在顯示親水性的抗體上結(jié)合大部分表現(xiàn)出疏水性的接頭-有效負(fù)載時(shí),表示附著在每個(gè)抗體上的藥物數(shù)量的dar為1-8的區(qū)域中不會(huì)出現(xiàn)大問題,但超過該范圍時(shí),會(huì)因聚集(aggregation)而在制備/運(yùn)輸/使用中出現(xiàn)問題或者由于在血液中形成聚集體(aggregate)而可能出現(xiàn)安全性的問題,并且由于脂溶性高,因此不會(huì)取決于抗體的藥物靶標(biāo)發(fā)生藥物吸收和有效負(fù)載的釋放(release),而是在巨噬細(xì)胞(macrophage)等中發(fā)生非選擇性攝取(non-selective?uptake),從而導(dǎo)致意想不到的副作用。另外,可以在將dar固定成特定數(shù)值的狀態(tài)下提高抗體的劑量,但這種情況下,(1)adc表現(xiàn)出的非選擇性攝取(non-selective?uptake)以及之后可能出現(xiàn)的脫靶毒性(off-target?toxicity)的問題,(2)構(gòu)成adc的抗體以很強(qiáng)的親和力(affinity)與癌細(xì)胞表面的藥物靶標(biāo)結(jié)合,但此時(shí),使血管周圍的藥物靶標(biāo)首先飽和(saturation),預(yù)定量以上的抗體結(jié)合后,由于額外的抗體(adc)無法滲透到癌組織內(nèi)部的問題,導(dǎo)致施用的adc變得無用的問題。16、在這些問題中,首先,為了解決非選擇性攝取(non-selective?uptake)之后可能出現(xiàn)的脫靶毒性(off-target?toxicity)的問題,許多使用在正常組織中表現(xiàn)出較高安全性的喜樹堿化合物的adc正在開發(fā)中,特別是,可通過日本第一三共株式會(huì)社(daiichisankyo)的enhertu、美國吉利德(gilead)公司的戈沙妥珠單抗(trodelvy)等的成功,表明這種接近方法是有效的。換句話說,enhertu的優(yōu)秀成功的預(yù)定部分是通過如下方法獲得的,即,通過使用安全的有效負(fù)載,來將adc的劑量從以往常規(guī)使用的2.7mpk水平提高到4.8-5.4mpk水平,從而從adc釋放的有效負(fù)載均勻分布在整個(gè)癌組織中。技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路1、技術(shù)問題2、將adc或其他靶向藥物偶聯(lián)物(targeted-drug?conjugate)輕松地送至癌組織內(nèi)部是非常重要的,事實(shí)上,從bicycle公司最近宣布的針對(duì)nectin-iv的多肽偶聯(lián)藥物(peptide-drug?conjugate)的結(jié)果來看,具有低dar的多肽偶聯(lián)藥物(peptide-drugconjugate)(dar?1)與作為具有高dar的商用adc?padcev(dar?4)相比,顯示出更優(yōu)異的功效,這表明將載體(carrier)有效分配到癌組織是很重要的。盡管如此,直到最近,用于開發(fā)adc的大多數(shù)抗體都是與kd值(kd?value)為1*10-10m以上且小于1*10-8m的藥物靶標(biāo)強(qiáng)力結(jié)合(binding)的抗體,這導(dǎo)致了adc和從adc釋放的有效負(fù)載主要僅積聚在癌癥內(nèi)部的血管(vessel)周圍,顯示出效力的局限性。3、因此,本發(fā)明人(1)使用kd值(kd?value)為1*10-8m以上且小于1*10-6m的抗體以確??贵w順利滲透到癌組織內(nèi)部,(2)導(dǎo)出將喜樹堿化合物用作有效負(fù)載的adc以確保足夠的adc劑量,通過這些,可同時(shí)確保足夠的adc使用量和通過向癌組織內(nèi)部的滲透的強(qiáng)大效力。4、另外,抗體介于受體引起內(nèi)化的特征,引起的抗原表位(epitope)結(jié)合力越強(qiáng),可發(fā)生更多的內(nèi)化,因此,反而反向使用與用于增加治療效果的抗原的結(jié)合力,本發(fā)明旨在使用作為靶向在正常細(xì)胞和癌細(xì)胞均表達(dá)的細(xì)胞表面蛋白的抗體,當(dāng)以二價(jià)而不是一價(jià)結(jié)合細(xì)胞表面蛋白的抗原表位時(shí),結(jié)合親和力更高,從而解決靶點(diǎn)關(guān)聯(lián)毒性(on?targettoxicity)問題,同時(shí)設(shè)計(jì)表現(xiàn)出抗癌效果的adc。5、解決問題的方案6、本發(fā)明的第一實(shí)施方式提供免疫綴合物或其藥學(xué)上可接受的鹽,其特征在于,降解ddx5蛋白的喜樹堿類藥物(a)通過接頭(c)與如下抗體或其含抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段結(jié)合:抗體或其含抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段(b-1),其對(duì)細(xì)胞表面蛋白的抗原表位的解離常數(shù)kd值(value)為1*10-8m以上且小于1*10-6m;或者抗體或其含抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段(b-2),其與在正常細(xì)胞和癌細(xì)胞中均表達(dá)的細(xì)胞表面蛋白結(jié)合,當(dāng)以二價(jià)而不是一價(jià)結(jié)合細(xì)胞表面蛋白的抗原表位時(shí),結(jié)合親和力更高。7、本發(fā)明的第二實(shí)施方式提供用于預(yù)防或治療癌癥的藥物組合物,該組合物包含第一實(shí)施方式的免疫綴合物或其藥學(xué)上可接受的鹽作為有效成分。8、以下,說明本發(fā)明。9、在本說明書中,癌癥和腫瘤可以互換使用。10、藥物的治療指數(shù)(therapeutic?index)是在藥物治療(medical?treatment)中衡量藥物的安全性和功效(safety?and?efficacy)的尺度。它被定義為引起治療效果(therapeutic?effect)的藥物的劑量和引起毒性或副作用(toxicity?or?adverseeffects)的劑量之間的比率。即,表示藥物的治療劑量與毒性劑量之間的范圍。11、高治療指數(shù)表明較寬的安全范圍(wide?margin?of?safety),其中,有效劑量(effective?dose)顯著低于毒性劑量(toxic?dose)。這意味著該藥物能夠以治療水平給藥,而不會(huì)引起要種的副作用或毒性。高治療指數(shù)的藥物通常認(rèn)為用于臨床更安全更優(yōu)選。12、反之,低治療指數(shù)表明狹窄的安全寬度。在這種情況下,有效劑量和毒性劑量相對(duì)接近,使用藥物時(shí)副作用或毒性風(fēng)險(xiǎn)較高。低治療指數(shù)的藥物需要慎重的檢測和準(zhǔn)確的給藥,以免對(duì)患者造成傷害。13、治療指數(shù)是藥物開發(fā)中的一個(gè)重要考慮因素,因?yàn)樗兄诖_定能夠提供所需治療效果同時(shí)最大限度降低副作用風(fēng)險(xiǎn)的劑量范圍。它在處方藥物時(shí)提供有用的信息,并允許評(píng)估藥物的總體效益與風(fēng)險(xiǎn)比。(benefit-to-risk?ratio)。14、為了使藥物在體內(nèi)有效發(fā)揮作用,體內(nèi)藥物濃度必須在一定時(shí)間以上維持在治療效果范圍(therapeutic?range)內(nèi)。若藥物在體內(nèi)過量存在,則會(huì)產(chǎn)生毒性,若藥物量過少,則沒有治療效果。15、藥物功效是指對(duì)目標(biāo)適應(yīng)癥顯出效果的預(yù)期時(shí)間內(nèi)不降解而留在體內(nèi)。若代謝率低,則血藥濃度維持時(shí)間變長,因此功效持續(xù)時(shí)間加長。16、在本說明書中,術(shù)語“抗體”包括與特定抗原免疫反應(yīng)的免疫球蛋白分子,并且包括例如充當(dāng)特異性識(shí)別作為抗原的細(xì)胞膜受體的配體的蛋白質(zhì)分子、多克隆抗體、單克隆抗體、全(whole)抗體。另外,所述術(shù)語包括嵌合抗體和二價(jià)(bivalent)或雙特異性分子、雙抗體、三抗體以及四抗體。所述術(shù)語還包括具有與fcrn的結(jié)合功能的單鏈抗體、scap、抗體恒定區(qū)的衍生物和基于蛋白質(zhì)的支架的人工抗體。總抗體是由兩條全長輕鏈和兩條全長的重鏈構(gòu)成,每條輕鏈通過二硫鍵與重鏈連接。所述總抗體包括iga、igd、ige、igm以及igg,igg的亞型(subtype)包括igg1、igg2、igg3以及igg4。17、在本說明書中,術(shù)語“含抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段”可以是具有抗體的抗原-結(jié)合活性的抗體的任意片段。示例性抗體片段包括但不限于單鏈抗體、fd、fab、fab'、f(ab')2、dsfv或scfv。所述fd是指fab片段中所包含的重鏈部分。所述fab是具有輕鏈和重鏈的可變區(qū)、輕鏈的恒定區(qū)和重鏈的第一恒定區(qū)(ch1結(jié)構(gòu)域)的結(jié)構(gòu),并且具有一個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)。fab'與fab的不同之處在于,在重鏈ch1結(jié)構(gòu)域的c末端有一個(gè)含有一個(gè)以上的半胱氨酸殘基的鉸鏈區(qū)(hinge?region)。f(ab')2抗體是當(dāng)fab'的鉸鏈區(qū)的半胱氨酸殘基形成二硫鍵時(shí)產(chǎn)生的。fv(variable?fragment)是指僅含重鏈可變位點(diǎn)和輕鏈可變位點(diǎn)的最小抗體片段。在雙二硫鍵fv(dsfv)中,重鏈可變位點(diǎn)和輕鏈可變位點(diǎn)通過二硫鍵連接,而在單鏈fv(scfv)中,重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)通過肽接頭共價(jià)連接。這種抗體片段可利用蛋白水解酶來獲得(例如,fab可通過用木瓜蛋白酶限制性消化總抗體來獲得,f(ab')2片段可通過用胃蛋白酶消化來獲得),優(yōu)選地,可通過基因重組技術(shù)來制備。18、在本發(fā)明中,術(shù)語“藥物-接頭綴合物”不僅指用于制備免疫綴合物或載體-藥物綴合物(carrier-drug?conjugate)的物質(zhì),而且指抗體、其含抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段或載體未連接,而且也可以根據(jù)目的,任選地與抗體、其含抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段、或載體結(jié)合而用作免疫綴合物或載體-藥物綴合物(carrier-drug?conjugate)。19、在本發(fā)明中,術(shù)語“免疫綴合物”是指細(xì)胞毒性藥物-接頭綴合物與抗體或其抗原結(jié)合片段連接的復(fù)合物。20、抗體-藥物綴合物(adc)是免疫綴合物的示例,在本發(fā)明中,對(duì)adc的說明和對(duì)免疫綴合物的說明可以互換使用。21、當(dāng)所述免疫綴合物施用于體內(nèi)時(shí),作為其一個(gè)結(jié)構(gòu),抗體或其含抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段與靶向抗原結(jié)合,然后釋放藥物,從而使藥物作用于靶細(xì)胞和/或周圍細(xì)胞,可預(yù)期作為靶藥物的優(yōu)異的藥效和減少的副作用。22、顯著影響免疫綴合物的效果的因素特別是(1)藥物功效(drug?potency)、(2)藥物接頭穩(wěn)定性(druglinker?stability)、(3)有效的靶藥物釋放(efficient?on-target?drugrelease)等。由于各種因素對(duì)效果具有復(fù)合性影響,因此僅根據(jù)對(duì)每個(gè)因素公知的情況來預(yù)測作為它們的組合的免疫綴合物的效果是非常困難的。23、在本發(fā)明中,所述免疫綴合物的平均藥物/抗體比(drug-to-antibody?ratio,dar)可以為2至12,優(yōu)選地,基于抗體的附著至每個(gè)抗體的藥物數(shù)量的dar可以為4-8或基于含抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段的dar可以為1-4。24、只有了解藥物的特性才能正確使用藥物。藥物的藥效學(xué)、藥代動(dòng)力學(xué)的參數(shù)有助于了解藥物的特性。25、藥效學(xué)中,將藥物與受體結(jié)合后細(xì)胞或體內(nèi)發(fā)生的變化(藥效,effect)(細(xì)胞活力(cellviability)、臨床效果(clinicaleffect))(治療作用(therapeutic?action)、毒性作用(toxic?effect)、不良反應(yīng)(adverse?effect))的幅度和模式通過與藥物濃度之間的關(guān)系來進(jìn)行說明。26、藥代動(dòng)力學(xué)(pharmaco-kinetics,pk)示出根據(jù)藥物或藥物的模式,藥物濃度通過代謝和排泄(adme)經(jīng)由身體不同區(qū)室(compartment)移動(dòng)時(shí)如何變化。27、另一方面,抗癌藥物的體內(nèi)功效(in?vivo?efficacy)和體內(nèi)副作用(in?vivoside?effects)與抗癌藥物的吸收、分布、代謝以及排泄(adme)特性密切相關(guān)。藥物的adme確定其藥代動(dòng)力學(xué),藥代動(dòng)力學(xué)描述了藥物通過身體(body)移動(dòng)并與組織和器官相互作用的方式。28、根據(jù)本發(fā)明的免疫綴合物或其藥學(xué)上可接受的鹽中,降解ddx5蛋白的喜樹堿類藥物(a)通過接頭(c)與如下抗體或其含抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段結(jié)合:抗體或其含抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段(b-1),其對(duì)細(xì)胞表面蛋白的抗原表位的解離常數(shù)kd值(value)為1*10-8m以上且小于1*10-6m;或者抗體或其含抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段(b-2),其與在正常細(xì)胞和癌細(xì)胞中均表達(dá)的細(xì)胞表面蛋白結(jié)合,當(dāng)以二價(jià)而不是一價(jià)結(jié)合細(xì)胞表面蛋白的抗原表位時(shí),結(jié)合親和力更高。29、在本發(fā)明中,降解ddx5蛋白的喜樹堿類藥物可以是以與ddx5蛋白和e3連接酶結(jié)合的方式設(shè)計(jì)的由式1、式2或式1-1表示的活性喜樹堿衍生物。30、31、32、x1及x3各自獨(dú)立地為碳、氧、氮或硫,x1及x3可相同或不同,33、x2為碳、氧、氮、硫、單鍵或雙鍵,34、x1、(x2)n及x3可形成5角、6角或7角環(huán),其n=0~2的值,35、y1、y2及y3可各自獨(dú)立地為氫或含氧、氮、磷或硫的官能團(tuán)。36、37、其中,含氧、氮、磷或硫的官能團(tuán)(functional?group)的非限制性示例可包括選自由-cho、-cooh、-nh2、-sh、-conh2、-po3h、-po4h2、-opo4h、-po2(or1)(or2)(r1、r2=cshtnuowsxpyxz、x=-f、-cl、-br或-i、0≤s≤20、0≤t≤2(s+u)+1、0≤u≤2s、0≤w≤2s、0≤x≤2s、0≤y≤2s、0≤z≤2s)、-so3h、-oso3h、-no2、-n3、-nr3oh(r=cnh2n+1、0≤n≤16)、-nr3+x-(r=cnhm、0≤n≤16、0≤m≤34、x=oh、cl或br)、nr4+x-(r=cnhm、0≤n≤16、0≤m≤34、x=oh、cl或br)、-cosh、-cooco-、-corco-(r=clhm、0≤l≤3、0≤m≤2l+1)、-coor、-cn、-n3、-n2、-nroh(r=cshtnuowsxpyxz、x=-f、-cl、-br或-i、0≤s≤20、0≤t≤2(s+u)+1、0≤u≤2s、0≤w≤2s、0≤x≤2s、0≤y≤2s、0≤z≤2s)、-nr1nr2r3(r1、r2、r3=cshtnuowsxpyxz、x=-f、-cl、-br或-i、0≤s≤20、0≤t≤2(s+u)+1、0≤u≤2s、0≤w≤2s、0≤x≤2s、0≤y≤2s、0≤z≤2s)、-conhnr1r2(r1、r2=cshtnuowsxpyxz、x=-f、-cl、-br或-i、0≤s≤20、0≤t≤2(s+u)+1、0≤u≤2s、0≤w≤2s、0≤x≤2s、0≤y≤2s、0≤z≤2s)、-nr1r2r3x’(r1、r2、r3=cshtnuowsxpyxz、x=-f、-cl、-br或-i、x’=f-、cl-、br-、或i-、0≤s≤20、0≤t≤2(s+u)+1、0≤u≤2s、0≤w≤2s、0≤x≤2s、0≤y≤2s、0≤z≤2s)、-oh、-o-、>c=o、-ss-、-so-、-no2、-cox(x=f、cl、br或i)、-cooco-、-conh-、-cn、-scoch3、-scn、-ncs、-nco、-ocn、-cn、-f、-cl、-i、-br、環(huán)氧基、-腙、-ono2、-po(oh)2、-c=nnh2、-hc=ch-、-c=c-、-c≡c-以及兩個(gè)以上碳的烴組成的組中的官能團(tuán)。38、由式1表示的活性喜樹堿衍生物的非限制性示例如下所示。39、40、41、42、考慮到adc將腫瘤特異抗原與靶向抗體連接并靶向細(xì)胞毒性分子進(jìn)行遞送的設(shè)計(jì)意圖,預(yù)計(jì)adc的毒性將小于常規(guī)化療。但是,大多數(shù)adc仍然承擔(dān)著與細(xì)胞毒性有效負(fù)載相似的靶外毒性,以及靶內(nèi)毒性(on-target?toxicities)和其他鮮為人知的可能潛在地危及生命的副作用。隨著adc的臨床適應(yīng)癥迅速擴(kuò)大,包括治療環(huán)境中的使用和多種組合,正在進(jìn)行用于改善安全性的廣泛的努力。目前正在推進(jìn)的接近方式中具有優(yōu)化劑量和治療日程的臨床試驗(yàn)、各adc成分的變更、毒性預(yù)測生物標(biāo)志物的識(shí)別、革新診斷工具開發(fā)等。43、鑒于此,根據(jù)本發(fā)明,由于以結(jié)合ddx5蛋白和e3連接酶的方式設(shè)計(jì)的活性喜樹堿衍生物,本發(fā)明的免疫綴合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的劑量可以為4.8mpk水平以下,優(yōu)選可以為2mpk~4.5mpk水平。44、另外,本發(fā)明的免疫綴合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的基于抗體的dar可以為4-8或基于含抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段的dar可以為1-4,其中,dar表示附著至每個(gè)抗體的藥物數(shù)量。45、構(gòu)成adc的抗體具有強(qiáng)親和力(affinity),與癌細(xì)胞表面的藥物靶標(biāo)結(jié)合時(shí),首先使血管周圍的藥物靶標(biāo)飽和(saturation),在預(yù)定量以上的抗體結(jié)合后,附加抗體(adc)無法滲透至癌組織內(nèi)部,由于這些問題,施用的adc變得無用,為了解決這種問題,并且為了使從adc釋放的有效負(fù)載均勻分布在整個(gè)癌組織上,本發(fā)明的免疫綴合物的特征在于,使用如下抗體或其含抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段:抗體或其含抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段(b-1),對(duì)細(xì)胞表面蛋白的抗原表位的解離常數(shù)kd值(value)為1*10-8m以上且小于1*10-6m;或者抗體或其含抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段(b-2),其與在正常細(xì)胞和癌細(xì)胞中均表達(dá)的細(xì)胞表面蛋白結(jié)合,當(dāng)以二價(jià)而不是一價(jià)結(jié)合細(xì)胞表面蛋白的抗原表位時(shí),結(jié)合親和力更高(圖22)。46、通過如上所述的抗體或其含抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段(b-2),本發(fā)明的免疫綴合物和/或從免疫綴合物釋放的有效負(fù)載可滲透至癌組織內(nèi)部,而不會(huì)僅聚集在癌癥內(nèi)部的血管(vessel)周圍。47、另外,通過如上所述的抗體或其含抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段(b-2),本發(fā)明的免疫綴合物(i)通過受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用(receptor-mediated?endocytosis)來削弱內(nèi)化(internalization)以提高治療效果,因此,(ii)可解決免疫綴合物的靶點(diǎn)關(guān)聯(lián)毒性(ontarget?toxicity)問題,同時(shí)發(fā)揮抗癌效果,(iii)可滲透到癌組織內(nèi)部的免疫綴合物的治療效果是緩解隨著癌細(xì)胞增殖形成的癌癥微環(huán)境內(nèi)的固體壓力,以可選擇性地(optionally)增加抗癌藥物和/或免疫治療藥物的接近。48、此時(shí),抗癌藥物可包含本發(fā)明的免疫綴合物和/或從免疫綴合物釋放的有效負(fù)載。因此,從本發(fā)明的免疫綴合物釋放的有效負(fù)載可有效發(fā)揮旁觀者效應(yīng)(bystandereffect)。49、另外,在本發(fā)明的免疫綴合物中,降解ddx5蛋白的喜樹堿類藥物(a)在血液或細(xì)胞外液的ph7.4下,作為top1解毒劑,從活性型內(nèi)酯(lacton)形式轉(zhuǎn)變?yōu)榉腔钚孕汪人猁}(carboxylate)形式(圖24及圖25),抗體或其含抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段可通過喜樹堿類藥物選擇性地識(shí)別需要細(xì)胞凋亡的癌細(xì)胞。50、因此,在本發(fā)明中,通過抗體或其含抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段選擇性地遞送具有強(qiáng)抗癌功效的藥物至癌細(xì)胞,因此不僅在無全身副作用的情況下顯示出強(qiáng)抗癌功效,而且使用降解ddx5蛋白的喜樹堿類藥物(a)來作為有效負(fù)載,可解決因遞送的有效負(fù)載藥物量的限制而效力受限的問題。51、[抗體-藥物綴合物(adc)及其副作用]52、抗體-藥物綴合物(adc)可在癌癥治療中用作靶向治療的一種。例如,單克隆抗體與細(xì)胞毒性藥物結(jié)合,并將藥物遞送至癌細(xì)胞。其為一種新型抗癌治療藥物模式(modality),即,adc與在癌細(xì)胞的表面表達(dá)的特定抗原結(jié)合,在能夠選擇性地識(shí)別癌細(xì)胞的抗體上,使用接頭,該接頭在adc在細(xì)胞內(nèi)部內(nèi)化(internalize)之前不釋放藥物,而保持結(jié)合狀態(tài),在細(xì)胞內(nèi)部中內(nèi)化后立即釋放藥物,從而結(jié)合抗癌藥物,該抗癌藥物在數(shù)pm至數(shù)nm的低濃度癌細(xì)胞下也能夠發(fā)揮強(qiáng)抗癌功效。53、結(jié)合到目標(biāo)細(xì)胞后,adc通過所謂受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用(receptor-mediatedendocytosis)的過程來內(nèi)化(internalize)到細(xì)胞內(nèi)。此時(shí),需要足夠濃度的活性藥物進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),但抗原-抗體復(fù)合物(complex)的內(nèi)化(internalization)過程通常效率低,細(xì)胞表面的抗原數(shù)量也通常限制在<1×105receptors/cell,因此必須使用非常強(qiáng)的藥物,由此即使在低濃度藥物中也能夠充分殺死腫瘤細(xì)胞。此外,需要在對(duì)抗體影響較小的情況下結(jié)合藥物,因此能夠運(yùn)輸?shù)呢?fù)載(payload)量是有限的。因此,與抗體結(jié)合后用作adc的藥物使用的是比普遍使用的抗癌藥物具有100-1000倍以上的細(xì)胞毒性的藥物。54、引入adc的大部分強(qiáng)力細(xì)胞毒性藥物的毒性過強(qiáng),而且因旁觀者效應(yīng)(bystandereffect),對(duì)正常細(xì)胞也產(chǎn)生了影響。這表明用于adc的細(xì)胞毒性藥物必須在低濃度(nm或pm)下能夠殺死大部分腫瘤細(xì)胞,在控制藥物釋放的同時(shí),需要發(fā)揮治療效果。55、adc結(jié)合了抗體的選擇性和抗癌藥物的強(qiáng)力細(xì)胞毒性,為很多癌癥患者展示了既能降低全身副作用的風(fēng)險(xiǎn),又能夠表現(xiàn)出強(qiáng)力抗癌治療功效的新的可能性,盡管如此,現(xiàn)有的很多adc在實(shí)際應(yīng)用中卻表現(xiàn)出各種局限性。當(dāng)dar為預(yù)定數(shù)量以上時(shí),存在的問題在于,由于所使用的藥物和接頭的疏水性,adc被癌細(xì)胞以外的正常細(xì)胞/正常組織無差別地吸收(非選擇性攝取(non-selective?uptake)),釋放藥物,導(dǎo)致藥物代謝動(dòng)力學(xué)(pk)屬性變差,出現(xiàn)意想不到的毒性。56、使用毒性相對(duì)較弱的有效負(fù)載和親水性接頭的組合的high?dar?adc的第一三共株式會(huì)社(daiichi?sankyo)的enhertu,為了使藥物和接頭與抗體結(jié)合(conjugation),將igg1?format的interchain?disulfide結(jié)合全部切割后,將獲得的8個(gè)游離硫醇(freethiol)官能團(tuán)全部與藥物-接頭組合反應(yīng),以獲得dar~8的pseudo-homogeneous?adc。此時(shí),與現(xiàn)有的接頭及有效負(fù)載相比,所使用的接頭和有效負(fù)載具有很強(qiáng)的親水性,因此具有即使高dar值下也幾乎沒有發(fā)生聚集(aggregation)問題,且pk屬性也可穩(wěn)定保持的特性。盡管如此,目前還存在非選擇性攝取(non-selective?uptake)的問題,因此10-15%的患者中出現(xiàn)了嚴(yán)重的炎癥性副作用的問題。57、術(shù)語“非選擇性吸收(non-selective?uptake)”一般是指在沒有特定靶標(biāo)或偏好的情況下,細(xì)胞吸收某種物質(zhì)。在adc的背景下,非選擇性吸收是指不表達(dá)靶抗原的細(xì)胞吸收adc或吸收其有效負(fù)載。58、據(jù)估計(jì),只有約0.1%的adc注入劑量被遞送到靶向疾病細(xì)胞群中,并且大部分施用劑量在非靶向健康細(xì)胞內(nèi)的“脫位點(diǎn)(off-site)”代謝,可能引起不需要的毒性。脫位點(diǎn)adc毒性可分為“靶內(nèi)(on-target)”或“靶外(off-target)”,靶內(nèi)毒性是通過adc與健康細(xì)胞靶細(xì)胞表面蛋白結(jié)合進(jìn)行的。包括抗體、接頭、有效負(fù)載的adc的各個(gè)成分可能影響adc引起的毒性。59、adc毒性的機(jī)制如圖26所示。完整的adc被吸收到正常細(xì)胞,這可通過非特異性細(xì)胞內(nèi)吸收來發(fā)生,或者可通過與靶抗原或fc/c型凝集素受體結(jié)合內(nèi)化來發(fā)生。在細(xì)胞外液中,從adc解偶聯(lián)或其他靶/非靶細(xì)胞凋亡細(xì)胞釋放的有效負(fù)載在膜通透性有效負(fù)載的情況下,可通過手動(dòng)擴(kuò)散進(jìn)入正常細(xì)胞。60、從概念上講,adc可以促進(jìn)細(xì)胞毒性有效負(fù)載分子靶向遞送至所需的細(xì)胞群(on-target,on-site?toxicity),以提高化療的選擇性,同時(shí)減少有效負(fù)載向非靶向健康組織的遞送,以拓寬治療指數(shù)。61、在技術(shù)開發(fā)早期階段,抗癌adc預(yù)期的安全性問題是靶抗原在表達(dá)一定程度的組織中的靶標(biāo)(即靶向介導(dǎo))毒性,預(yù)計(jì)靶向在癌細(xì)胞和健康組織中差異表達(dá)將成為確定adc的治療指數(shù)的重要因素。但是,隨后根據(jù)對(duì)adc的臨床經(jīng)驗(yàn)證明,劑量限制性毒性(dlt)很少由健康組織中的靶向表達(dá)引起。62、根據(jù)2012-2013年提交的20份adc臨床試驗(yàn)用新藥(ind)申請(qǐng)的臨床前和臨床數(shù)據(jù),無關(guān)于靶抗原和健康組織中抗原的表達(dá)程度如何,具有同種接頭/有效負(fù)載的adc通常共有非常相似的毒性屬性、dlt以及最大耐受量(mtd)。63、親脂性(lipophilic)有效負(fù)載具有高血漿膜通透性,因此釋放的有效負(fù)載可以有效地(例如,通過膜擴(kuò)散)進(jìn)入非靶細(xì)胞,并可能潛在性地引起不需要的細(xì)胞毒性。64、因此,為了控制活性喜樹堿衍生物的旁觀者效應(yīng)(bystander?effect)和/或adme特征,以便通過提供所需程度的疏水性和/或控制聚集,來經(jīng)由淋巴引流(drainage)快速或緩慢地去除,鑒于此,在本發(fā)明的免疫綴合物中,降解ddx5蛋白的喜樹堿類藥物可選自以與ddx5蛋白和e3連接酶結(jié)合的方式設(shè)計(jì)的、由式1、式2或式1-1表示的活性喜樹堿衍生物,從而能夠以各種方式設(shè)計(jì)包含這種本發(fā)明的免疫綴合物的抗癌制劑、其劑量(dose)以及用量(dosage)。65、作為減少adc的非選擇性吸收(non-selective?uptake)的方法,降低dar是已經(jīng)確立的方法,但使用喜樹堿(camptothecin)系列有效負(fù)載等的細(xì)胞毒性(cytotoxicity)相對(duì)較低的藥物的本發(fā)明的免疫綴合物為了確保足夠的效力,維持dar高于4的high-dar也很重要。66、在adc中相當(dāng)于“非選擇性吸收(non-selective?uptake)”的her2陰性細(xì)胞株(her2?negative?cellline)mda-mb-468中,ic50結(jié)果為trastuzumab-25-6(dar?6)的情況(ic50=97.61nm)比trastuzumab-25-6(dar?4)的情況(ic50=240.7nm)低于2.5倍。67、這可以通過調(diào)節(jié)喜樹堿類有效負(fù)載的dar,對(duì)脫靶(off-target)的毒性方面(減少有效載荷遞送到非靶向健康組織)提高治療指數(shù)。即,dar=4時(shí),即使施用比dar=6時(shí)更高含量的adc,也能維持有效負(fù)載的“非選擇性吸收(non-selective?uptake)”之一的旁細(xì)胞殺傷作用(by-stander?cell-killing現(xiàn)象)較低水平。68、[基于喜樹堿類有效負(fù)載的adc(adcs?with?camptothecin?payloads)的臨床結(jié)果和副作用]69、德曲妥珠單抗(trastuzumab?deruxtecan,商品名稱:enhertu)是通過穩(wěn)定的接頭連接到作為喜樹堿衍生物的deruxtecan的人源化抗her2抗體。在第一次i期劑量遞增研究中,22例her-2陽性進(jìn)行性或轉(zhuǎn)移性乳腺癌、胃癌或其他her-2表達(dá)實(shí)體腫瘤患者為對(duì)象,每3周接受一次德曲妥珠單抗0.8mg/kg~8.0mg/kg治療。未觀察到劑量限制性毒性,未達(dá)到mtd。目標(biāo)藥物暴露是在以推薦的ii期劑量選擇的6.4mg/kg劑量下實(shí)現(xiàn)的。70、作為中樞性單組ii期臨床試驗(yàn)的destiny-breast01臨床試驗(yàn)由兩個(gè)部分組成。在第一部分,隨機(jī)分配先前以兩種以上的抗her2治療接受過治療的進(jìn)展性/轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者,以5.4mg/kg(n=50)、6.4mg/kg(n=48)或7.4mg/kg(n=21)劑量每3周給藥一次德曲妥珠單抗。在第二部分,基于從第一部分獲得的功效和毒性數(shù)據(jù),對(duì)134名患者給藥5.4mg/kg劑量。在184例用德曲妥珠單抗5.4mg/kg接受治療的患者中,所有級(jí)別(≥20%)的不良反應(yīng)中最常見的不良反應(yīng)是惡心(77.5%)、疲勞(49.8%)、脫發(fā)(49.8%)、嘔吐(44.3%)、中性粒細(xì)胞減少(40.3%)、便秘(37.5%)、貧血(33.6%)、食欲下降(33.2%)、腹瀉(29.2%)、白細(xì)胞減少(26.9%)、血小板減少(24.9%)。57.1%的患者中發(fā)生了iii級(jí)以上的不良反應(yīng),以中性粒細(xì)胞減少(20.7%)、貧血(8.7%)、惡心(7.6%)、白細(xì)胞減少(6.5%)、淋巴細(xì)胞減少癥(6.5%)、疲勞(6.0%)最為常見。因不良反應(yīng)引起的停藥、減藥、中斷治療分別出現(xiàn)在35.3%、23.4%、15.2%的患者中,肺炎(11例)和間質(zhì)性肺病(5例)是最常見的原因。對(duì)接受德曲妥珠單抗治療的患者的黑框警告中包含間質(zhì)性肺病(ild)和肺炎。接受德曲妥珠單抗治療的患者的9%和2.6%中,出現(xiàn)了治療相關(guān)間質(zhì)性肺病和致命的結(jié)果。與其他her-2靶向adc一樣,接受德曲妥珠單抗治療的患者也增加了胚胎-胎兒毒性及左心室功能障礙的風(fēng)險(xiǎn)。71、另一方面,戈沙妥珠單抗(sacituzumab?govitecan,商品名:戈沙妥珠單抗(trodelvy))是通過對(duì)ph敏感的接頭連接到伊立替康(sn-38)的活性代謝產(chǎn)物的人源化抗-top-2igg。首次人類受試劑量遞增1/ii期臨床i期中,以25例各種轉(zhuǎn)移性實(shí)體腫瘤患者為對(duì)象,于21天周期的第1天和第8天以從8mg/kg至18mg/kg的劑量給藥沙西妥珠單抗戈維替康。第一個(gè)循環(huán)的mtd被確定為12mg/kg,中性粒細(xì)胞減少已被證明劑量限制性毒性。但是,該劑量水平對(duì)后續(xù)周期毒性過強(qiáng),因此在ii期臨床試驗(yàn)中選擇了8mg/kg和10mg/kg劑量。在該臨床ii期中,對(duì)以前接受過各種治療的各種轉(zhuǎn)移性上皮癌患者以8mg/kg(n=81)或10mg/kg(n=97)的劑量給藥沙西妥珠單抗戈維替康。8mg/kg和10mg/kg隊(duì)列中報(bào)告的所有級(jí)別(≥25%)的最常見的不良反應(yīng)分別出現(xiàn)惡心(59%vs.63%)、腹瀉(53%vs.62%)、中性粒細(xì)胞減少(42%vs.58%).58%)、疲勞(61%vs.52%)、嘔吐(36%vs.43%)、貧血(38%vs.42%)、脫發(fā)(46%vs.37%)、便秘(33%vs.37%)。8mg/kg和10mg/kg給藥組報(bào)告的iii級(jí)以上(≥10%)的最常見的不良反應(yīng)為中性粒細(xì)胞減少癥(30%vs.36%)、貧血(13%vs.12%)、腹瀉(4%vs.10%)、白細(xì)胞減少(6%vs.12%)。8mg/kg和10mg/kg隊(duì)列中分別在19%和28%的患者中出現(xiàn)了劑量減少現(xiàn)象。中性粒細(xì)胞減少癥是導(dǎo)致劑量延遲或減少的最常見不良反應(yīng)。10mg/kg隊(duì)列中首次給藥后經(jīng)歷了iii級(jí)以上的中性粒細(xì)胞減少癥的患者比8mg/kg隊(duì)列明顯更多(47%vs.21%)。72、在沙西妥珠單抗戈維替康標(biāo)簽中添加了針對(duì)重癥或威脅生命的中性粒細(xì)胞減少癥和重癥腹瀉的黑框警告。這些副作用由釋放的(“游離”)sn-38介導(dǎo)的可能性很高,這是因?yàn)樗c作為sn-38前藥的伊立替康相同的毒性相關(guān)聯(lián)。在所有接受過沙西妥珠單抗戈維替康治療的患者中,所有級(jí)別和3級(jí)以上的中性粒細(xì)胞減少癥分別出現(xiàn)61%和47%。7%的患者中出現(xiàn)熱性中性粒細(xì)胞減少癥。在所有接受過沙西妥珠單抗戈維替康治療的患者中,65%和12%中分別發(fā)生所有級(jí)別和3級(jí)以上的腹瀉。在0.5%的患者中出現(xiàn)中性粒細(xì)胞減少性結(jié)腸炎。73、[降解ddx5蛋白的喜樹堿類藥物(a)及其抗癌機(jī)制]74、靶向治療藥物與以往使用的細(xì)胞毒性(cytotoxic)抗癌藥物在治療機(jī)制上存在差異。細(xì)胞毒性抗癌藥物作用于快速分裂的細(xì)胞的dna或微管(microtubule)等,因此無法避免對(duì)正常細(xì)胞的毒性,但靶向治療藥物利用分子靶點(diǎn)選擇性地僅攻擊癌細(xì)胞。作為靶向治療藥物的分子靶點(diǎn),包括血管生成、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞的信號(hào)傳導(dǎo)通路、細(xì)胞周期調(diào)節(jié)因子等,針對(duì)不同靶點(diǎn)開發(fā)靶向治療藥物。靶向治療藥物的治療效果通常具有抑制細(xì)胞增殖的作用,因此通常長期單獨(dú)使用或與其他細(xì)胞毒性抗癌藥物聯(lián)合使用。75、抗體被認(rèn)為是確定adc的效果的重要組成物,但執(zhí)行腫瘤細(xì)胞殺傷的就是細(xì)胞毒性藥物。細(xì)胞毒性藥物是誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞殺傷的小分子藥物(smallmoleculedrugs)。在adc構(gòu)成中,相當(dāng)于負(fù)載(payload)的細(xì)胞毒性藥物(cytotoxic?drug)在殺死癌細(xì)胞中起到重要作用,是對(duì)體現(xiàn)藥效非常重要的構(gòu)成要素。76、因此,雖然將更強(qiáng)的細(xì)胞毒性藥物引入adc,但大部分毒性過強(qiáng),而且由于旁觀者效應(yīng),對(duì)正常細(xì)胞也產(chǎn)生了影響。此外,由于要在對(duì)抗體影響較小的同時(shí)結(jié)合藥物,因此可以運(yùn)輸?shù)呢?fù)載(payload)的量是有限的。這表明應(yīng)用于adc的細(xì)胞毒性藥物必須能夠在低濃度(nm或pm)下殺死大部分腫瘤細(xì)胞,并且必須受到藥物釋放控制才能發(fā)揮治療效果。由此可見,可作為負(fù)載(payload)的細(xì)胞毒性藥物種類繁多,但最重要的是其免疫原性必須低,在體內(nèi)循環(huán)中必須具有穩(wěn)定的特性。因?yàn)椴环€(wěn)定的細(xì)胞毒性負(fù)載(cytotoxic?payload)可能會(huì)在結(jié)合(conjugate)或儲(chǔ)存過程中發(fā)生藥物的修飾。77、在adc等免疫綴合物中用作負(fù)載(payload)的抗癌藥物可抑制與促進(jìn)細(xì)胞生長、促進(jìn)細(xì)胞存活、促進(jìn)細(xì)胞移動(dòng)性相關(guān)的促癌因子(oncoprotein),或恢復(fù)/再激活/穩(wěn)定與抑制細(xì)胞生長、促進(jìn)細(xì)胞凋亡、抑制細(xì)胞移動(dòng)性相關(guān)的抑癌因子(例如p53)。78、細(xì)胞凋亡在維持組織穩(wěn)態(tài)和形態(tài)、調(diào)節(jié)細(xì)胞數(shù)量、清除受損或異常細(xì)胞以及作為對(duì)抗感染的防御機(jī)制中發(fā)揮著非常重要的作用,生物體通過精確控制細(xì)胞生長、分化和死亡過程來其生命維持正常。細(xì)胞凋亡的類型可分為細(xì)胞壞死(necrosis)和細(xì)胞程序性死亡(programmed?celldeath,apoptosis),其中,細(xì)胞程序性死亡被解釋為伴隨著各種基因的表達(dá)和作為表達(dá)產(chǎn)物的蛋白質(zhì)的激活,誘導(dǎo)細(xì)胞的死亡的復(fù)雜過程。這種細(xì)胞程序性死亡是一種細(xì)胞內(nèi)生理性主動(dòng)自殺機(jī)制,在多細(xì)胞生物體的發(fā)育和分化以及維持體內(nèi)平衡中發(fā)揮著重要作用。由于多種因素,各種類型的細(xì)胞都會(huì)發(fā)生凋亡,與細(xì)胞壞死不同,沒有溶酶體(lysosome)酶的游離,而是發(fā)現(xiàn)細(xì)胞程序性死亡小體(apoptotic?body),觀察到細(xì)胞皺縮、核濃縮以及特征性的梯形dna片段。79、抗凋亡蛋白(anti-apoptotic?protein)的抑制程度如圖7及圖8所示,結(jié)合到腫瘤蛋白ddx5(oncoprotein?ddx5)并降解其的喜樹堿類藥物可以作為分子靶點(diǎn)來控制選自由c-myc、surviving、ciap2、bcl-2、xiap以及mutant?kras組成的組中的細(xì)胞凋亡(apoptosis)相關(guān)蛋白。80、因此,[結(jié)合到腫瘤蛋白ddx5(oncoprotein?ddx5)并降解其的喜樹堿類藥物]作為應(yīng)用于adc的有效負(fù)載,在低濃度(nm或pm)下可殺死大部分腫瘤細(xì)胞。81、鑒于此,本發(fā)明的免疫綴合物的特征在于,有效負(fù)載結(jié)合到ddx5蛋白和e3連接酶以降解ddx5蛋白的喜樹堿類藥物,并且可選自以與ddx5蛋白和e3連接酶結(jié)合的方式設(shè)計(jì)的、由式1、式2或式1-1表示的活性喜樹堿衍生物。82、根據(jù)本發(fā)明的作為免疫綴合物的有效負(fù)載的降解ddx5蛋白的喜樹堿類藥物(a)是能夠穿過細(xì)胞膜的疏水性小分子,因此可以滲透至癌組織深部,能夠以高濃度積累,穿過細(xì)胞膜,在細(xì)胞內(nèi)部發(fā)揮細(xì)胞毒性,殺死細(xì)胞后釋放,在周圍細(xì)胞也可以連續(xù)穿過細(xì)胞膜移動(dòng)到細(xì)胞內(nèi)并發(fā)揮作用。83、在根據(jù)本發(fā)明的作為免疫綴合物的有效負(fù)載的降解ddx5蛋白的喜樹堿類藥物(a)中,為了控制活性喜樹堿衍生物的旁觀者效應(yīng)(bystander?effect)和/或adme特征,以便通過提供所需程度疏水性和/或控制聚集,來經(jīng)由淋巴引流(drainage)快速或緩慢地去除,可選自以與ddx5蛋白和e3連接酶結(jié)合的方式設(shè)計(jì)的、由式1、式2或式1-1表示的活性喜樹堿衍生物,從而能夠以各種方式設(shè)計(jì)包含這種本發(fā)明的免疫綴合物的抗癌制劑、其劑量(dose)以及用量(dosage)。84、抗凋亡蛋白(anti-apoptic?protein)是抗癌藥物耐藥性的主要原因,包括survivin、ciap2、xiap等(圖6)。85、與sn-38不同,參與耐藥性機(jī)制的耐藥性蛋白survivin等抑制bcl?family或結(jié)合降解用于控制c-myc、survivin以及mutant?kras的oncoprotein?ddx5(p68)的喜樹堿類細(xì)胞毒性藥物的非限制性示例包括fl118(式1-1)、由式1或式2(exatecan,dxd)表示的活性喜樹堿衍生物等(圖7)。86、針對(duì)細(xì)胞程序性死亡(apoptsis)通路,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡也是很好的癌癥治療方法。另外,抑制1型拓?fù)洚悩?gòu)酶的喜樹堿類細(xì)胞毒性藥物是dna修飾制劑,因此可以無關(guān)于細(xì)胞周期而殺死細(xì)胞。因此,降解ddx5蛋白的喜樹堿類細(xì)胞毒性藥物以與ddx5蛋白和e3連接酶結(jié)合方式設(shè)計(jì)而成,與1型拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制能力一同,通過降解腫瘤蛋白(oncoprotein)ddx5的作用機(jī)制(moa),不僅可殺死細(xì)胞,而且無關(guān)于細(xì)胞周期,細(xì)胞凋亡效果優(yōu)異。87、fl118(式1-1)可通過直接綴合ddx5和泛素化調(diào)節(jié)因子以具有降解ddx5的分子膠降解劑(molecular?glue?degrader)的作用。88、89、fl118具有分子膠(molecular?glue)作用,在不減少ddx5?mrna的情況下,通過蛋白酶體降解途徑直接連接到作為多功能主調(diào)節(jié)因子(multifunctional?masterregulator)的腫瘤蛋白ddx5中,并具有對(duì)其進(jìn)行去磷酸化和降解的功能,ddx5沉默表示ddx5為用于調(diào)節(jié)包括生存素、mcl-1、xiap、ciap2、c-myc以及突變kras在內(nèi)的多種致癌蛋白的表達(dá)的主調(diào)節(jié)因子。90、另外,從源頭上切斷大部分癌癥共同耐藥性發(fā)生機(jī)制-抗細(xì)胞凋亡蛋白(anti-apoptotic?protein)的過表達(dá),可避免耐藥性;可預(yù)測患者中的抗癌反應(yīng)的生物標(biāo)志物(ddx5、k-ras、p53)、同步診斷技術(shù)等已經(jīng)確立,通過確保定制型生物標(biāo)志物,可通過同步診斷進(jìn)行個(gè)人定制型治療,尤其在預(yù)后不佳的p53/k-ras突變癌細(xì)胞中表現(xiàn)出強(qiáng)力功效。91、fl118通過間接控制ddx5下游靶標(biāo),如使用人類結(jié)直腸癌/胰腺癌細(xì)胞以及腫瘤模型的研究中所證實(shí),以高效抑制癌癥的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)以及治療耐藥性(cancerinitiation,development,metastasis,recurrence?and?treatment?resistance)。92、pdac細(xì)胞中,ddx5的基因操作會(huì)影響腫瘤生長。具有ddx5?ko的pdac細(xì)胞對(duì)fl118處理具有耐藥性。人類腫瘤動(dòng)物模型研究表明,fl118在消除高ddx5表達(dá)的人pdac和crc腫瘤方面顯示出高效,而fl118對(duì)低ddx5表達(dá)的pdac和crc腫瘤中效果欠佳。93、ddx5蛋白是fl118藥物的直接靶標(biāo),可用作預(yù)測fl118的pdac和crc腫瘤敏感性(tumour?sensitivity)的生物標(biāo)志物。94、另一方面,fl118藥物在癌細(xì)胞中具有與sn-38同等水平的top1抑制功效,在各種癌細(xì)胞系中與sn-38相比強(qiáng)5-20倍,即以低水平的ic50數(shù)值表現(xiàn)出細(xì)胞毒性(cytotoxicity),對(duì)140種源自各種癌癥類型的細(xì)胞系的評(píng)價(jià)結(jié)果中也示出非常強(qiáng)的抗癌功效,對(duì)于大多數(shù)癌細(xì)胞的ic50,示出<100nm。fl118藥物通過大鼠和比格犬的glp-毒性測試確保了優(yōu)異的安全性,并且在各種癌細(xì)胞系xenograft模型中顯示出比sn-38更優(yōu)異的功效。另一方面,對(duì)于喜樹堿(camptothecin)類抗癌藥物,當(dāng)用于患者時(shí),最初表現(xiàn)出優(yōu)異的抗癌反應(yīng),但通過top1基因的表觀遺傳沉默(epigenetic?silencing)和癌細(xì)胞的top2依賴性(dependence),表現(xiàn)出對(duì)這些藥物的強(qiáng)效耐藥性。反之,fl118藥物即使在通過表觀遺傳沉默(epigenetic?silencing)或敲除(knock-out)top1不表達(dá)的癌細(xì)胞系的異種移植(xenograft)模型中也表現(xiàn)出強(qiáng)大功效。95、此外,fl118藥物將已確定的抗癌靶標(biāo)1型拓?fù)洚悩?gòu)酶作為直接靶標(biāo),并且是同時(shí)抑制參與耐藥性機(jī)制的耐藥蛋白survivin等bcl家族成員(bclfamily),并抑制外排泵(efflux?pump)單作用的三重靶點(diǎn)抗癌藥物。96、具體而言,sn-38等喜樹堿類(camptothecin)抗癌藥物因abcg2?transporter的過表達(dá)而在細(xì)胞外釋放藥物的方式表現(xiàn)出耐藥性,但fl118藥物不受abcg2轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(transporter)的影響,因此可克服對(duì)其的耐藥性。fl118藥物可以通過在低濃度下強(qiáng)烈抑制作為抗癌藥物耐藥性的另一個(gè)主要原因的抗凋亡蛋白(anti-apoptotic?protein)(survivin、ciap2,xiap等)的表達(dá),以阻斷耐藥性的表達(dá)。97、因此,fl118藥物不會(huì)被外排泵(efflux?pump)abcg2排出細(xì)胞外,并且可以阻斷各種抗凋亡蛋白(anti-apoptotic?protein)引起的耐藥性。其結(jié)果,fl118藥物可克服sn-38/依喜替康(exatecan)的各種耐藥作用機(jī)制。98、當(dāng)以與sn-38相同量向體內(nèi)(in?vivo)施用fl118藥物時(shí),結(jié)腸癌/頭頸癌/胰腺癌等中表現(xiàn)出比sn-38更強(qiáng)力的(腫瘤消退(tumor?regression))功效。99、fl118藥物在移植腫瘤(tumor?xenograft)中誘導(dǎo)sn-38耐藥性后,fl118給藥時(shí)也保留了強(qiáng)抗癌功效。100、進(jìn)而,fl118藥物對(duì)于靶向藥物遞送(targeted?drug?delivery,例如,載體藥物綴合物(carrier-drug?conjugate)應(yīng)用具有最佳的pk/safety?profile。fl118藥物單獨(dú)全身給藥時(shí),迅速從血液代謝/排出,僅示出低濃度,但給藥后立即在癌組織中迅速蓄積,并長時(shí)間維持高濃度。例如,但應(yīng)用adc時(shí),確保腫瘤組織與正常組織之間的最大選擇性。101、依喜替康(exatecan)是喜樹堿衍生物,是抑制1型拓?fù)洚悩?gòu)酶的抗腫瘤性小分子化合物。依喜替康是被證實(shí)為比sn-38強(qiáng)5-10倍的細(xì)胞毒性(cellular?cytotoxicity)的物質(zhì)。102、依喜替康與伊立替康不同,不需要酶激活。此外,與伊立替康的藥效主體sn-38或同臨床使用的拓?fù)涮婵迪啾龋?型拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制活性更強(qiáng),在體外(in?vitro)對(duì)各種癌細(xì)胞具有更強(qiáng)的細(xì)胞毒性活性。特別是,通過p-glycoprotein的表達(dá),對(duì)sn-38等表現(xiàn)出抗性的癌細(xì)胞也產(chǎn)生了效果。此外,小鼠的人腫瘤皮下移植模型中也表現(xiàn)出很強(qiáng)的抗腫瘤效果,由此進(jìn)行了臨床試驗(yàn)。103、dxd(用于adc的exatecan衍生物)是強(qiáng)力dna拓?fù)洚悩?gòu)酶i抑制物,其用作her2靶標(biāo)adc(ds-8201a)的綴合藥物的ic50為0.31μm。104、令人驚訝的是,如后文中所述,本發(fā)明人在基于區(qū)別于sn38藥物的fl118藥物結(jié)構(gòu),作為fl118藥物優(yōu)點(diǎn)的抑制1型拓?fù)洚悩?gòu)酶以及降解ddx5的方面上設(shè)計(jì)發(fā)揮其中的作用機(jī)制(dualmoa)的結(jié)構(gòu)的喜樹堿衍生物的過程中(圖1)發(fā)現(xiàn),依喜替康或dxd也發(fā)揮著降解ddx5蛋白的作用機(jī)制(moa)(圖7至圖10)。105、基于此,根據(jù)本發(fā)明以不同方式設(shè)計(jì)式1或式2的喜樹堿類藥物,并將其用作本發(fā)明的免疫綴合物的有效負(fù)載,以便能夠發(fā)揮fl118藥物中預(yù)示的抗癌藥物的各種優(yōu)點(diǎn),這是另一個(gè)特征。106、107、x1及x3各自獨(dú)立地為碳、氧、氮或硫,x1及x3可相同或不同,108、x2為碳、氧、氮、硫、單鍵或雙鍵,109、x1、(x2)n及x3可形成5角、6角或7角環(huán),其n=0~2的值,110、y1、y2及y3可各自獨(dú)立地為氫或含氧、氮、磷或硫的官能團(tuán)。111、在本發(fā)明中,用作有效負(fù)載的式1或式2的喜樹堿類藥物的特征在于,在通式1中,a環(huán)上的r1和r2(a組(group?a))設(shè)計(jì)成與fl118化合物或依喜替康/dxd相同/在結(jié)構(gòu)上極其相似(圖1),從而發(fā)揮降解細(xì)胞內(nèi)腫瘤蛋白(oncoprotein)ddx5的抗癌機(jī)制(圖7至圖10)。112、113、具有1型拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制能力和降解腫瘤蛋白(oncoprotein)ddx5的雙重作用機(jī)制(dualmoa)的活性喜樹堿衍生物的合成設(shè)計(jì)概念(synthetic?design?concept)是基于構(gòu)效關(guān)系(structure?activity?relationship,sar),維持1型拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制區(qū)域c組(group?c)的結(jié)構(gòu),用于降解ddx5的結(jié)合位點(diǎn)a組(group?a)也位于與fl118相同的結(jié)構(gòu)或與依喜替康和dxd相同的結(jié)構(gòu),將通式1中b組(group?b)的結(jié)構(gòu)(r3及r4)調(diào)整為如式1或式2,從而提高藥物的物化性質(zhì),以解決將其作為有效負(fù)載的adc的聚集問題,還可以設(shè)計(jì)出通過調(diào)節(jié)adc釋放的有效負(fù)載(活性喜樹堿類藥物)的細(xì)胞毒性(cytotoxicity)和/或藥物的腫瘤組織的滲透和/或細(xì)胞膜滲透性,以能夠精確控制旁觀者效應(yīng)(bystander?effect)的結(jié)構(gòu)。114、在通式1中,c組(group?c)位點(diǎn)與1型拓?fù)洚悩?gòu)酶結(jié)合,a組(group?a)位點(diǎn)與dna結(jié)合,穩(wěn)定拓?fù)洚悩?gòu)酶-dna復(fù)合物的共價(jià)鍵,以阻礙切割的dna片段重新連接,和/或,在通式1中,a組(group?a)位點(diǎn)與ddx5結(jié)合,c組(group?c)位點(diǎn)與e3連接酶結(jié)合,以能夠誘導(dǎo)ddx5降解(參見全文并入本說明書中的pct/kr2023/005380)。115、優(yōu)選地,本發(fā)明以如下方式設(shè)計(jì)式1或式2的喜樹堿類藥物:通過通式1中r3和/或r4修飾,將細(xì)胞膜滲透性按照所需來調(diào)節(jié),以在腫瘤組織中發(fā)揮適當(dāng)?shù)呐杂^者效應(yīng)(bystander?effect)。116、因此,本發(fā)明的主要特征還在于,不僅考慮多種副作用,還考慮治療系數(shù)減少等問題,將發(fā)揮適當(dāng)抗癌功效的adc有效載荷的選擇范圍擴(kuò)大到包括以通過分子膠降解劑(molecular?glue?degrader)來與ddx5蛋白和e3連接酶結(jié)合的方式設(shè)計(jì)的、式1或式2的活性喜樹堿衍生物的各種候選組。117、根據(jù)本發(fā)明,以與ddx5蛋白和/或e3連接酶結(jié)合的方式設(shè)計(jì)的、式1或式2的喜樹堿類藥物,可通過分子膠降解劑(molecular?glue?degrader)機(jī)制(moa)來殺死表達(dá)ddx5蛋白的靶細(xì)胞。118、靶細(xì)胞可以是癌細(xì)胞或衰老細(xì)胞。衰老細(xì)胞中還包括不執(zhí)行器官固有特征功能的細(xì)胞。119、優(yōu)選地,根據(jù)本發(fā)明,以與ddx5蛋白和/或e3連接酶結(jié)合的方式設(shè)計(jì)的、式1或式2的喜樹堿類藥物可以是具有1型拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制能力的同時(shí)具有降解腫瘤蛋白(oncoprotein)ddx5的多作用機(jī)制(moa)。120、根據(jù)本發(fā)明的式1,例如由pbx-7011和pbx-7012表示的喜樹堿衍生物被設(shè)計(jì)如下:具有五環(huán)結(jié)構(gòu),該結(jié)構(gòu)在細(xì)胞毒性所必需的e環(huán)中具有內(nèi)酯,如圖1所示的喜樹堿,并且是旨在維持位于e環(huán)的c20位的內(nèi)酯基團(tuán)和α羥基,這對(duì)于1型拓?fù)洚悩?gòu)酶-dna副產(chǎn)物的穩(wěn)定性很重要。通式1中exatecan類藥物的結(jié)構(gòu)特征如下:(1)保持與ddx5蛋白結(jié)合的、與fl118藥物(-och2o-(methylenedioxo)五角環(huán))的取向結(jié)構(gòu)相似的r1和r2的結(jié)構(gòu)特征(ch3-c=c-f),同時(shí),(2)通過r3和r4,與a環(huán)和b環(huán)形成的芳香環(huán)的堆積π-π堆積(stacking)來誘導(dǎo)聚集的sn-38相比,例如從a環(huán)和b環(huán)延伸的6角環(huán)或7角環(huán)的連續(xù)碳-碳單鍵的各種取向達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡,從而可削弱或抑制a環(huán)和b環(huán)形成的芳香環(huán)的堆積(stacking)。121、另外,pbx-7011化合物允許分子鍵相對(duì)于從a環(huán)和b環(huán)延伸的6角環(huán)上的碳-碳單鍵旋轉(zhuǎn),使自由度大的-nh2暴露于水(h2o),帶(+)電荷或與水形成氫鍵來增加水分散性(water?dispersibility)。122、另外,pbx-7014化合物允許分子鍵相對(duì)于從a環(huán)和b環(huán)延伸的6角環(huán)上的碳-碳單鍵旋轉(zhuǎn),使自由度大的-nh2的乳酸(lactic?acid)形式的官能團(tuán)ch2(oh)conh-暴露于水(h2o),并像螺旋槳一樣旋轉(zhuǎn)的同時(shí)與水形成氫鍵來增加水分散性。123、另外,pbx-7016化合物是在pbx-7014化合物中引入甲基的化合物,該甲基是代謝不穩(wěn)定的官能團(tuán),以減少藥物的壽命。對(duì)代謝極其穩(wěn)定且代謝緩慢的藥物可能會(huì)因蓄積而產(chǎn)生毒性和嚴(yán)重副作用的風(fēng)險(xiǎn),因此有必要確保適當(dāng)?shù)谋A魰r(shí)間。124、另一方面,enhertu中使用的dxd?payload最初是由幾乎不受abcg2影響的依喜替康(exatecan)化合物制成,但由于用于將依喜替康(exatecan)轉(zhuǎn)化為dxd的乙醇酸(glycolic?acid)(α-羥基乙酸(alpha-hydroxy?acetic?acid))官能團(tuán)的存在,因abcg2而受到強(qiáng)烈影響。但是,乙醇酸(glycolic?acid)官能團(tuán)對(duì)enhertu的優(yōu)異的安全性/功效特征起著非常重要的作用,當(dāng)將其消除時(shí),將會(huì)給adc制備帶來困難,同時(shí)會(huì)帶來惡化adc在動(dòng)物模型、臨床試驗(yàn)中的特性(安全性問題或功效降低)問題。因此,非常需要能夠輕松用于adc生產(chǎn)并且不受abcg2影響的新型喜樹堿衍生物。pbx-7024化合物是從pbx-7011化合物衍生的化合物,是不受abcg2影響,且可以容易地用于adc制備的新型喜樹堿化合物。125、為了確認(rèn)pbx-7024的抗癌功效,fadu(一種不表達(dá)abcg2的癌細(xì)胞)和a549(過表達(dá)abcg2的癌細(xì)胞)中進(jìn)行了功效評(píng)價(jià)。在過表達(dá)abcg2的癌細(xì)胞系a549中,可以確認(rèn),與包括dxd在內(nèi)的喜樹堿化合物示出增加的ic50數(shù)值的情況相比,pbx-7016和pbx-7024可仍然保持強(qiáng)大功效,如圖9所示。126、如圖9所示,在fadu(不表達(dá)abcg2的her2-low/mid癌細(xì)胞)和a549(過表達(dá)abcg2的癌細(xì)胞)中用不同濃度處理各種喜樹堿類藥物,可以確認(rèn)細(xì)胞內(nèi)ddx5蛋白的逛街程度和由此產(chǎn)生的survivin、mcl-1、xiap以及ciap2的癌癥相關(guān)存活基因(cancer-associatedsurvival?genes)的表達(dá)抑制活性,并且可間接比較和確認(rèn)細(xì)胞膜滲透性。127、[作為以ddx5結(jié)合的分子膠降解劑(molecular?glue?degrader)的抗癌機(jī)制]128、泛素-蛋白酶體系統(tǒng)(ups)是用于降解細(xì)胞內(nèi)蛋白的重要途徑,所述細(xì)胞內(nèi)蛋白用于調(diào)節(jié)廣泛的細(xì)胞過程。泛素是通過包括泛素激活酶(e1s)、泛素結(jié)合酶(e2s)以及泛素連接酶(e3s)在內(nèi)的一系列酶促反應(yīng),與底物蛋白的賴氨酸殘基共價(jià)連接的小蛋白質(zhì)。將該過程稱為泛素化(ubiquitination),并且為用于調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)降解、信號(hào)傳導(dǎo)以及運(yùn)輸?shù)闹匾獧C(jī)制。129、泛素連接酶在泛素化途徑中負(fù)責(zé)底物特異性。130、與此相關(guān)地,根據(jù)本發(fā)明的由式1或式2的喜樹堿類藥物以與ddx5蛋白和e3連接酶結(jié)合的方式設(shè)計(jì)的。131、正常細(xì)胞向癌細(xì)胞(cancerous?cell)轉(zhuǎn)化是由包含蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)的代謝途徑不調(diào)節(jié)(deregulation)引起的。細(xì)胞酶和ddx5在維持正常細(xì)胞代謝中起重要作用,但如果它們不受調(diào)節(jié)(deregulation),則可以加速腫瘤的轉(zhuǎn)化。ddx5均與數(shù)百種不同的細(xì)胞蛋白相互作用,根據(jù)所涉及的特定途徑,這兩種蛋白均可作為腫瘤抑制基因或腫瘤基因。132、ddx5(也稱為p68)是作用于如下機(jī)制的多功能主調(diào)節(jié)因子(multifunctionalmaster?regulator):(1)通過與腫瘤基因啟動(dòng)子(oncogenic?gene?promoters)中各種轉(zhuǎn)錄因子(例如c-myc)之間的直接相互作用,將多數(shù)腫瘤基因的轉(zhuǎn)錄共同激活(co-activation)的生物過程;(2)調(diào)節(jié)mirna和pre-rna剪接(例如u1、u2、u3、...snrnp)的生物過程;以及(3)核糖體生物合成(例如32s?rrna、前核糖體(pre-ribosome))。133、根據(jù)本發(fā)明的式1或式2的喜樹堿類藥物在沒有ddx5?mrna減少的情況下與ddx5蛋白結(jié)合,并通過功能性去磷酸化和蛋白酶體降解途徑來進(jìn)行降解,這意味著式1或式2的喜樹堿類藥物在ddx5和泛素相關(guān)蛋白質(zhì)穩(wěn)定性/降解調(diào)節(jié)劑(ubiquitin-involved?proteinstability/degradation?regulators)上均可附著,并充當(dāng)“分子膠降解劑”。134、眾所周知,ddx5下游蛋白靶標(biāo)(ddx5?downstream?protein?targets)均與癌癥發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)以及治療耐藥性有關(guān)。因此,當(dāng)通過根據(jù)本發(fā)明的式1或式2的喜樹堿類藥物的ddx5蛋白的降解,間接阻斷ddx5下游靶標(biāo)時(shí),由式1或式2的喜樹堿類藥物可表現(xiàn)出高抗腫瘤功效。135、ddx5(p68)是一種眾所周知的多功能dead-box?rna?helicase解旋酶和轉(zhuǎn)錄輔助因子(transcription?cofactor)。因此,當(dāng)由于ddx5的生理狀態(tài)導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄因子失調(diào)(deregulation)而發(fā)生癌癥時(shí),可通過選擇性降解轉(zhuǎn)錄輔助因子(transcriptioncofactor)ddx5(p68),以治療癌癥疾病。同樣,可通過選擇性降解轉(zhuǎn)錄輔助因子(transcription?cofactor)ddx5(p68)來預(yù)防癌癥疾病。136、由于ddx5蛋白是藥物靶標(biāo),因此根據(jù)本發(fā)明的式1或式2的喜樹堿類藥物可以避免耐藥性、對(duì)靶向治療的耐藥性和/或治療過程中的耐藥性。另外,通過式1或式2的喜樹堿類藥物,可阻斷(off)抗凋亡基因(anti-apoptotic?genes)的轉(zhuǎn)錄誘導(dǎo)。此外,通過式1或式2的喜樹堿類藥物,作為轉(zhuǎn)錄輔助因子(transcription?cofactor)的ddx5蛋白降解,從而可維持或提高癌細(xì)胞的對(duì)化療或放療的敏感性。137、[分子膠降解劑(molecular?glue?degrader)的藥物模式的優(yōu)點(diǎn)]138、體內(nèi)細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)在發(fā)揮其功能后幾小時(shí)到幾天內(nèi)自然降解。在體內(nèi)的所有細(xì)胞中,都存在一個(gè)降解蛋白質(zhì)的所謂泛素蛋白酶體系統(tǒng)(ubiquitin?proteasome?system,ups)的凈化系統(tǒng),在該過程中,泛素發(fā)揮標(biāo)記(marker)作用,以告知需要降解的蛋白質(zhì),蛋白酶體具有識(shí)別泛素標(biāo)記,并破壞對(duì)應(yīng)蛋白質(zhì)的粉碎機(jī)作用。即,已發(fā)揮完其功能的蛋白質(zhì)旁邊,如標(biāo)記一樣附著多個(gè)所謂泛素(ubiquitin)的物質(zhì),所謂蛋白酶體(proteasome)的物質(zhì)僅挑具有該標(biāo)記的蛋白質(zhì),然后向粉碎機(jī)一樣將其降解。e3連接酶是在體內(nèi)引起蛋白質(zhì)降解系統(tǒng)的酶,并且負(fù)責(zé)泛素化途徑中的底物特異性。139、分子膠降解劑(molecular?glue?degrader)或分子膠(molecular?glue)是具有將目標(biāo)蛋白附著到我們體內(nèi)特定酶(e3連接酶)上的粘合劑功能的化合物。分子膠(molecularglue)的優(yōu)點(diǎn)之一是催化作用,降解目標(biāo)蛋白,然后再次分離以降解另一種目標(biāo)蛋白。140、當(dāng)e3連接酶通過分子膠(molecular?glue)附著在腫瘤蛋白時(shí),腫瘤蛋白被降解,其他腫瘤蛋白連續(xù)被降解,直到靶向的腫瘤蛋白消失為止,從而可阻止癌細(xì)胞增殖。因此,腫瘤蛋白的分子膠克服了作為靶向抗癌藥物的問題的耐藥性,并且即使在低給藥劑量下也具有高治療效果。141、根據(jù)本發(fā)明的用作有效負(fù)載的式1或式2的喜樹堿類藥物是與ddx5蛋白和e3連接酶結(jié)合的分子膠降解劑(molecular?glue?degrader),即是激活腫瘤蛋白ddx5或其磷酸化ddx5蛋白(p-ddx5)降解的分子膠降解劑(圖3、圖26、圖27)。142、分子膠降解劑(molecular?glue?degrader)不僅是與目標(biāo)蛋白結(jié)合的配體(warhead),而且可充當(dāng)e3連接酶配體(binder)。143、因此,根據(jù)本發(fā)明的式1或式2的喜樹堿類藥物是激活腫瘤蛋白ddx5降解的分子膠降解劑,因此可用作靶向ddx5蛋白的配體或與ddx5蛋白結(jié)合的配體。144、與激酶抑制劑不同,分子膠降解劑(molecular?glue?degrader)是“鄰近驅(qū)動(dòng)(proximity-driven)”,誘導(dǎo)降解的能力是取決于臨時(shí)“目標(biāo)蛋白-分子膠(molecularglue)-e3連接酶”三重復(fù)合物的形成的“事件驅(qū)動(dòng)(event-driven)”。發(fā)生降解后,分離的分子膠(molecular?glue)與目標(biāo)蛋白形成額外的三重復(fù)合物,可進(jìn)行多次降解過程,直到目標(biāo)蛋白消失。145、大多數(shù)作為藥物靶標(biāo)的蛋白質(zhì)會(huì)產(chǎn)生適應(yīng)藥物而進(jìn)化的耐藥性。但是,具有將腫瘤蛋白和e3連接酶結(jié)合在一起的粘合劑功能的低分子化合物的分子膠(molecular?glue)對(duì)耐藥性較強(qiáng),因此是適合癌癥治療藥物的模式。146、每次發(fā)生基因突變,藥物靶標(biāo)蛋白的形狀都會(huì)稍微變化。用一種藥物阻斷所有變體的活性固然很好,但由于選擇性問題,這是不可能的。為了用一種藥物阻斷所有突變的活性,而使藥物靶標(biāo)蛋白降解并完全消除。147、因此,根據(jù)本發(fā)明的式1或式2的喜樹堿類藥物是能夠與ddx5癌蛋白準(zhǔn)確結(jié)合的藥物,并且可通過選擇性降解蛋白的分子膠(molecular?glue)接近方法,以避免靶向治療藥物的耐藥性問題。148、根據(jù)本發(fā)明的式1或式2的喜樹堿類藥物根據(jù)其物化性質(zhì)確定與目標(biāo)蛋白ddx5腫瘤蛋白的結(jié)合強(qiáng)度,并且優(yōu)選為不可逆藥物,其結(jié)合過強(qiáng)以至于無法返回到其之前的狀態(tài)。149、與現(xiàn)有sn38藥物不同,根據(jù)本發(fā)明的式1或式2的喜樹堿類藥物對(duì)ddx5蛋白的親和力高,不易脫落并通過分子膠(molecular?glue)功能降解ddx5,從而不僅可不可逆地抑制癌細(xì)胞中ddx5相關(guān)信號(hào)傳導(dǎo),而且根據(jù)其物化性質(zhì)來按需調(diào)節(jié)藥物的細(xì)胞膜通透性,以發(fā)揮旁觀者效應(yīng)(bystander?effect)或控制其效果的程度,從而周圍細(xì)胞殺傷效果高,這有利于異質(zhì)性腫瘤的治療,而且可抑制長期癌癥進(jìn)展,降低耐藥性表達(dá)的風(fēng)險(xiǎn),以提高治療反應(yīng)率。150、根據(jù)本發(fā)明的式1或式2的喜樹堿類藥物可與在細(xì)胞內(nèi)充當(dāng)腫瘤蛋白(oncoprotein)的ddx5結(jié)合,以能夠通過ddx5蛋白降解來誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡(cell?death)(圖9及圖10)。151、在癌癥治療中,內(nèi)在耐藥性可由異常表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子引起,轉(zhuǎn)錄因子是細(xì)胞增殖和細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子。因此,根據(jù)本發(fā)明的式1或式2的喜樹堿類藥物通過作為轉(zhuǎn)錄因子輔助因子且腫瘤蛋白(oncoprotein)的與ddx5結(jié)合的分子膠降解劑(molecular?gluedegrader)的作用機(jī)制,可誘導(dǎo)ddx5蛋白降解以及由此導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡(celldeath)。此時(shí),ddx5蛋白降解可下調(diào)抗細(xì)胞凋亡基因(anti-apoptotic?genes)的轉(zhuǎn)錄(圖26及圖27)。因此,與其他靶向治療藥物不同,異常表達(dá)的因細(xì)胞增殖和/或細(xì)胞凋亡相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子引起的耐藥性不會(huì)發(fā)生,和/或可抑制通過在化療和/或放療過程中失調(diào)的轉(zhuǎn)錄因子的激活誘導(dǎo)的后天耐藥性。152、也就是說,根據(jù)本發(fā)明的式1或式2的喜樹堿類藥物的抗癌機(jī)制可以繞過癌癥治療耐藥性的分子機(jī)制,因此在耐藥性問題上可能會(huì)具有自由性。當(dāng)出現(xiàn)耐藥性時(shí),比之前治療效果降低,因此,根據(jù)本發(fā)明的式1或式2的喜樹堿類藥物可優(yōu)選作為癌癥診斷后標(biāo)準(zhǔn)治療藥物或初級(jí)治療藥物。153、簡而言之,根據(jù)本發(fā)明用作有效負(fù)載的式1或式2的喜樹堿類藥物可以是作用于ddx5蛋白的靶向抗癌藥物,ddx5蛋白在癌細(xì)胞的生長、存活(細(xì)胞存活(cell?survivor))、增殖、轉(zhuǎn)移和/或代謝上發(fā)揮重要作用。154、[抗體-藥物綴合物(adc)的adme特征]155、抗癌藥物的體內(nèi)功效(in?vivo?efficacy)和體內(nèi)副作用(in?vivo?sideeffects)可受adc以及由此釋放的有效負(fù)載的吸收、分布、代謝以及排泄(absorption,distribution,metabolism,and?excretion,adme)特性的影響。藥物的adme特征會(huì)影響其到達(dá)癌細(xì)胞并對(duì)其起作用的能力。也就是說,adc以及由此釋放的有效負(fù)載的adme特性可對(duì)體內(nèi)功效(in?vivo?efficacy)和體內(nèi)副作用(in?vivo?side?effects)產(chǎn)生重大影響。156、穿透腫瘤組織的adc以及由此釋放的有效負(fù)載的能力也可能受到包括血流和細(xì)胞密度的腫瘤微環(huán)境等因素的影響。157、因此,理解adc以及由此釋放的有效負(fù)載的adme特性,并優(yōu)化藥物/藥物模式的選擇以及劑量/用量,可以提高這些adc以及由此釋放的有效負(fù)載的治療指數(shù),從而為癌癥患者帶來更好的結(jié)果。158、由于不同結(jié)構(gòu)和作用機(jī)制,抗體(ab)和抗體-藥物綴合物(adc)具有不同的壽命(life?time)和adme特征。159、抗體是與外部物質(zhì)(抗原)反應(yīng)并通過免疫體系自然生成的大蛋白質(zhì)。由于其大小和復(fù)雜結(jié)構(gòu),具有很長的循環(huán)半衰期(幾周到幾個(gè)月),可保護(hù)其免于降解和消除??贵w分布在包括組織在內(nèi)的全身各處,能夠以高特異性和親和力與靶抗原相互作用??贵w主要通過包括肝臟和脾臟在內(nèi)的網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)(res)和腎臟及其他器官的降解代謝消除。160、adc由與細(xì)胞毒性藥物分子綴合的抗體(通常是單克隆抗體)組成。抗體成分提供對(duì)腫瘤或患病組織的特異性和靶向性,反之,藥物成分(由adc釋放的有效負(fù)載)提供殺死靶細(xì)胞的細(xì)胞毒性活性。adc的半衰期比抗體短,通常為幾天到一周。這是因?yàn)閍dc內(nèi)化到靶細(xì)胞中,導(dǎo)致adc的溶酶體降解和藥物有效負(fù)載的釋放。adc主要由res消除,但由adc釋放的藥物有效負(fù)載也可通過淋巴引流(drainage),隨后通過循環(huán)系統(tǒng)在肝臟和腎臟中進(jìn)行代謝和排泄(metabolism?and?excretion)(實(shí)施例2)。161、如單克隆抗體的藥代動(dòng)力學(xué)和生物分布所預(yù)期的那樣,即使在adc中,與細(xì)胞膜蛋白的高親和力mab結(jié)合可使大部分mab定位到靶細(xì)胞群中,有效負(fù)載和抗癌mab的化學(xué)綴合使有效負(fù)載遞送至癌細(xì)胞的選擇性增加以提高有效負(fù)載的治療指數(shù)。162、抗體通常通過皮下或靜脈注射給藥并吸收到血液中。它們可分布在全身,包括組織,但由于其尺寸大,因此局限于細(xì)胞外空間。adc也通過注射給藥并吸收到血流中,但由于抗體成分,在靶向腫瘤或患病組織以及根據(jù)情況受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用(receptor-mediatedendocytosis)后,由adc釋放的藥物有效負(fù)載可根據(jù)其物化性質(zhì)(例如,疏水性、尺寸、聚集與否)穿透到細(xì)胞和組織中,并可通過非選擇性吸收(non-selective?uptake)產(chǎn)生旁觀者效應(yīng)(bystander?effect)(圖26)。此外,adc的代謝和排泄根據(jù)特定結(jié)構(gòu)(specificstructure)和所使用的特定藥物或抗體(specific?drug?or?antibody)而異。163、藥物抗體比(drug-to-antibody?ratio)dar是確定adc開發(fā)中藥代動(dòng)力學(xué)特性和體內(nèi)分布的非常重要的特性。164、越是具有較高dar的adc,在體外(in?vitro)試驗(yàn)中表現(xiàn)出更高的功效。然而,與預(yù)期相反,具有較高的dar的adc表現(xiàn)出較低的體內(nèi)功效,這被推測為是因?yàn)樗Y(jié)合的藥物較多的adc具有較高的血漿清除率。因此,adc制劑的dar一段時(shí)間以來一直被設(shè)定在2~4左右。為此,主要采用將藥物與抗體的半胱氨酸或賴氨酸殘基結(jié)合的技術(shù)。165、主要使用的許多細(xì)胞毒性藥物和接頭都是疏水性(hydrophobicity),因此會(huì)出現(xiàn)adc聚集、對(duì)靶抗原的親和力喪失或血漿清除率增加等問題。含有磺酸鹽(sulfonate)或聚乙醇(polyethylene?glycol,peg)的親水性接頭解決了疏水性接頭引起的問題。peg接頭具有水溶性、低毒性、低免疫原性的優(yōu)點(diǎn)。166、長期以來,人們一直認(rèn)為dar約為4是最佳的,但事實(shí)上,這適用于使用mmae或dm1作為藥物的第二代接頭,而在第三代接頭中,dar越高越好。許多最近批準(zhǔn)的adc的dar值接近8,目前處于臨床試驗(yàn)中的新adc的dar值在1到15之間。167、使用基于喜樹堿(camptothecin)的有效負(fù)載的adc(antibody-drug?conjugates)作為治療各種癌癥(尤其是實(shí)體瘤)的新方法而備受矚目。在這些adc中,特別是包含針對(duì)adc療法優(yōu)化的新合成的基于喜樹堿的有效負(fù)載(例如dxd)的新型adc(例如,enhertu)最近因其成功的臨床結(jié)果而受到特別關(guān)注。168、這些adc的成功可能部分歸因于新的喜樹堿所具有的如下特征:(1)優(yōu)異的細(xì)胞生長抑制;(2)比現(xiàn)有adc有效負(fù)載更好的安全性特征;(3)優(yōu)化的旁觀者效應(yīng);以及(4)適合生成高dar?adc的優(yōu)異的物化性質(zhì)。然而,盡管利用基于enhertu或ds-1062a等喜樹堿(camptothecin)的有效負(fù)載的adc取得了顯著成功,但如上所述,仍然存在明顯的未滿足需求,包括安全性的改善(間質(zhì)性肺疾病(ild)和中性粒細(xì)胞減少癥的最小化)和開發(fā)具有多重moa有效負(fù)載的新型adc以解決癌癥的異質(zhì)性。169、為了解決這些未滿足的需求,本發(fā)明提供式1或式2的活性喜樹堿衍生物,其設(shè)計(jì)為作為分子膠降解劑(molecular?glue?degrader),以結(jié)合到ddx5蛋白和e3連接酶,并用作提供各種物化性質(zhì)的候選藥物,進(jìn)而,合成由式1或式2表示的新的基于喜樹堿的有效負(fù)載(pbx系列化合物)并進(jìn)行了評(píng)價(jià)(制備例1至制備例4)(圖18至圖23)。170、由式1表示的新型pbx系列化合物是以式1-1的fl118作為母核的衍生物,是一種安全性優(yōu)異且強(qiáng)大的雙重top1/抗細(xì)胞凋亡途徑抑制物,具有與dxd相當(dāng)?shù)膹?qiáng)ex-vivo細(xì)胞毒性,在以小鼠為對(duì)象的初步毒性研究中示出優(yōu)異的安全性,并且在pk研究中示出快速清除(實(shí)施例2、表3及表4)。當(dāng)接頭用作adc的有效負(fù)載而早起裂解時(shí),可使全身副作用最小化。171、如圖24所示,經(jīng)確認(rèn),其為在ph7.4下從內(nèi)酯形式到羧酸鹽的轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)的結(jié)果(實(shí)施例3),血液或細(xì)胞外液的ph7.4下,由式1表示的pbx-7014、pbx-7016以及pbx-7024化合物與其他參考(reference)化合物(依喜替康、dxd、sn-38、fl118)相比更快,而且以更高比率內(nèi)酯(lacton)形式(活性形式)下,作為top1解毒劑,轉(zhuǎn)化為失活的羧酸鹽(carboxylate)形式(非活性形式)。172、特別是,在血液ph7.4下,作為top1解毒劑失活的羧酸鹽形式(carboxylate?form)的形成程度(63~86%)和速率(0.4~0.8%/min)根據(jù)喜樹堿衍生物的種類而存在差異(圖24)。pbx-7014、pbx-7016形成86%以上的羧酸鹽形式(carboxylate?form),并且均以每分鐘0.8%的水平相當(dāng)快速地從內(nèi)酯形式(lactone?form)轉(zhuǎn)化為羧酸鹽形式(carboxylateform)。作為競爭藥物的dxd形成76.5%水平的羧酸鹽形式(carboxylate?form),并且以每分鐘0.6%的水平從內(nèi)酯形式(lactone?form)轉(zhuǎn)化為羧酸鹽形式(carboxylate?form)。173、微腫瘤環(huán)境(tme)的ph6.0下,作為top1抑制劑具有活性的內(nèi)酯形式(lactoneform)的形成速率(測量羧酸鹽形式(carboxylate?form))被確認(rèn)為對(duì)于所有評(píng)價(jià)藥物是相似水平的(大約經(jīng)過800分鐘后,形成20%水平的羧酸鹽形式(carboxylate?form))(圖25)。174、由此,與參考(reference)化合物相比,由式1表示的化合物,例如pbx-7014、pbx-7016以及pbx-7024化合物,在血液或細(xì)胞外液(除腫瘤組織之外的正常組織)中形成無活性的羧酸鹽形式(carboxylate?form),而不是以快速且高比率表現(xiàn)出細(xì)胞毒性的活性形式即lacton,從而具有相對(duì)較低的毒性,即,預(yù)期在正常細(xì)胞中表現(xiàn)出高安全性。然而,在微腫瘤環(huán)境下,由式1表示的pbx-7014、pbx-7016以及pbx-7024化合物均形成內(nèi)酯形式(lactoneform),其活性與其他top1抑制劑水平相同,因此功效沒有降低。175、雖然本發(fā)明的免疫抗癌劑可以設(shè)計(jì)成劑量依賴性抗癌功效(conc.vs.effect)和/或根據(jù)時(shí)間產(chǎn)生的抗癌功效(effect?vs.time)優(yōu)異,然而,根據(jù)情況,隨時(shí)間推移,優(yōu)異的抗癌功效也可能會(huì)使副作用增加(由于慢性抗原暴露導(dǎo)致持續(xù)性t細(xì)胞激活和抑制信號(hào)積累以及由此引起的t細(xì)胞耗竭(t?cellexhaustion)、對(duì)腫瘤組織周圍結(jié)締組織來源的成纖維細(xì)胞的周圍細(xì)胞殺傷效果產(chǎn)生的副作用、ild、中性粒細(xì)胞減少癥)。例如,式1或式2的活性喜樹堿衍生物的藥物模式(small?molecule?vs.adc),超過特定藥物濃度(高)可能很重要,根據(jù)情況,維持特定藥物濃度(低)以上的時(shí)間可能很重要,并且通過提供所需程度的疏水性和/或控制聚集,以經(jīng)由淋巴引流(drainage)快速或緩慢消除也可能很重要。176、因此,本發(fā)明的主要特征還在于,不僅考慮到各種副作用,而且還考慮到治療系數(shù)降低等問題,能夠?qū)l(fā)揮適當(dāng)抗癌功效的adc的有效負(fù)載的選擇范圍擴(kuò)展至包含以通過分子膠降解劑(molecular?glue?degrader)與ddx5蛋白和e3連接酶結(jié)合的方式設(shè)計(jì)的、式1或式2的活性喜樹堿衍生物的各種候選組。177、盡管利用基于喜樹堿的有效負(fù)載(如enhertu或ds-1062a所示)的adc取得了顯著的成功,但盡管如此,作為用于改善安全性(ild和中性粒細(xì)胞減少癥的最小化)和解決癌癥異質(zhì)性的多重moa有效負(fù)載的候選,根據(jù)本發(fā)明以多種方式提供以結(jié)合到ddx5蛋白和e3連接酶的方式設(shè)計(jì)的由式1或式2表示的活性喜樹堿衍生物,為了能夠精細(xì)地提供所需功效(例如,抗癌、聯(lián)合療法)以及副作用(促進(jìn)致癌炎癥、耐藥性、ild、中性粒細(xì)胞減少癥),選擇式1的活性喜樹堿衍生物中一種以上的合適的藥物,進(jìn)而選擇合適的接頭,并可使用合適的劑量(dose)-用量(dosage)。178、[adc的毒性特征、非選擇性吸收(non-selective?uptake)以及周圍細(xì)胞殺傷效果(bystander?effect)]179、藥物的治療指數(shù)(therapeutic?index)是在藥物治療(medical?treatment)中測量藥物的安全性和功效(safety?and?efficacy)的衡量標(biāo)準(zhǔn)。引起治療效果(therapeuticeffect)的藥物的劑量與引起毒性或副作用(toxicity?or?adverse?effects)的劑量之間的比率。也就是說,表示藥物的治療劑量與毒性劑量之間的范圍。180、高治療指數(shù)表明較寬的安全范圍(wide?margin?of?safety),其中有效劑量(effective?dose)顯著低于毒性劑量(toxic?dose)。這意味著能夠以治療水平施用藥物,而不會(huì)引發(fā)嚴(yán)重的副作用或毒性。通常認(rèn)為高治療指數(shù)的藥物更安全、更適合臨床上使用。181、反之,低治療指數(shù)是指狹窄的安全性的寬度。在這種情況下,有效劑量和毒性劑量比較接近,使用藥物時(shí),副作用或毒性風(fēng)險(xiǎn)較高。治療指數(shù)低的藥物需要慎重的監(jiān)測和準(zhǔn)確的劑量,以免對(duì)患者造成傷害。182、治療指數(shù)是藥物開發(fā)中的一個(gè)重要考慮因素,因?yàn)樗兄诖_定能夠提供所需治療效果同時(shí)最大限度降低副作用風(fēng)險(xiǎn)的劑量范圍。在處方藥物時(shí)提供有用的信息,并允許評(píng)估藥物的總體效益與風(fēng)險(xiǎn)比(benefit-to-risk?ratio)。183、抗體-藥物綴合物(adc)是一類快速發(fā)展的抗癌治療藥物,目前超過100個(gè)以上的adc處于臨床研究中。目前,美國食品藥品監(jiān)督管理局(fda)批準(zhǔn)了gemtuzumab?ozogamicin(mylotarg)、brentuximab?vedotin(adcetris)、inotuzumab?ozogamicin(besponsa)、trastuzumab?emtansine(kadcyla)、polatuzumab?vedotin(polivy)、enfortumab?vedotin(padcev)、trastuzumab?deruxtecan(enhertu)、sacituzumab?govitecan(trodelvy)、belantamab?mafodotin(blenrep)、loncastuximab?tesirine(zynlonta)、tisotumabvedotin(tivdak)、and?mirvetuximab?soravtansine(elahere)等12種adc。進(jìn)而,相對(duì)少量的有效負(fù)載分子(例如,mmae、mmaf、dm1、dm4、刺孢霉素、sn38、dxd、pbd)使用于大多數(shù)已批準(zhǔn)的adc和正在開發(fā)的adc中。184、盡管一些adc已表現(xiàn)出足夠的功效和安全性以獲得fda批準(zhǔn),但所有adc的臨床使用都會(huì)對(duì)治療的患者造成顯著的毒性,并且許多adc由于不可接受的毒性特征而在臨床開發(fā)過程中失敗。這是因?yàn)楫愇欢拘匀匀皇且粋€(gè)問題,將adc的耐受劑量限制在低于顯著抗癌功效所需的劑量。即使對(duì)于fda批準(zhǔn)的adc,很大一部分接受治療的患者也需要輔助治療以減輕adc相關(guān)毒性的嚴(yán)重程度,并且許多患者需要減少劑量、延遲治療或停止治療。185、臨床數(shù)據(jù)分析表明,無論目標(biāo)抗原和/或正在治療的癌癥類型如何,劑量限制性毒性(dose-limiting?toxicities,dlt)通常由多個(gè)提供相同細(xì)胞毒性有效負(fù)載的adc共享。dlt通常與不表達(dá)靶抗原(即脫靶毒性)的細(xì)胞和組織相關(guān),通常將adc劑量限制在最佳抗癌功效所需的劑量以下。186、與作為單一藥物使用時(shí)相比,adc有潛力安全地提高細(xì)胞毒性藥物的療效。adc將藥物附著在抗體上,使抗體僅特異性地靶向病變部位,從而使藥物僅遞送至病變部位,而不遞送至正常組織。就癌細(xì)胞而言,與癌細(xì)胞表面表達(dá)的特定抗原特異性結(jié)合的抗體被用來特異性地將劇毒藥物遞送至癌細(xì)胞,僅殺死癌細(xì)胞。187、為了使adc工作,它必須進(jìn)入目標(biāo)細(xì)胞。adc的抗體與例如癌細(xì)胞的靶細(xì)胞表面表達(dá)的特定抗原特異性結(jié)合,然后通過細(xì)胞膜中網(wǎng)格蛋白包被小窩(clathrin-coated?pit)工作機(jī)制進(jìn)入目標(biāo)細(xì)胞。188、陷入細(xì)胞內(nèi)的adc與網(wǎng)格蛋白分離,與細(xì)胞內(nèi)的其他囊泡(vesicles)融合,然后遵循內(nèi)涵體-溶酶體(endosome-lysosome)途徑。到達(dá)內(nèi)涵體后,藥物通過特異性腫瘤細(xì)胞內(nèi)部環(huán)境的特定元素與抗體分離。與抗體分離的獨(dú)立自由的細(xì)胞毒性藥物穿透溶酶體膜后進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)。激活的藥物通過與周圍區(qū)域自身的分子靶標(biāo)結(jié)合,誘導(dǎo)細(xì)胞死亡并殺死癌細(xì)胞,從而發(fā)揮藥理作用。189、在這些活動(dòng)中,一些細(xì)胞毒性藥物被動(dòng)擴(kuò)散、主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)或通過死細(xì)胞逸出細(xì)胞外。在這些活動(dòng)中,一些細(xì)胞毒性藥物被動(dòng)擴(kuò)散、主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)或通過死細(xì)胞逸出細(xì)胞外(即所謂旁觀者細(xì)胞殺傷by-stander?cell-killing現(xiàn)象)。190、大多數(shù)引入adc的強(qiáng)效細(xì)胞毒性藥物毒性太大,并且由于旁觀者效應(yīng)(bystandereffect),adc釋放的藥物有效負(fù)載也會(huì)影響正常細(xì)胞(圖26)。191、因此,有必要開發(fā)一種能夠非常特異性地作用于靶標(biāo)癌細(xì)胞而不會(huì)對(duì)正常細(xì)胞造成嚴(yán)重副作用的adc。192、成纖維細(xì)胞(fibroblasts)是結(jié)締組織的一員,尤其是在乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌的情況下間質(zhì)(stroma)中具有優(yōu)勢(shì)的細(xì)胞。193、間質(zhì)成纖維細(xì)胞(stromal?fibroblasts)也稱為癌癥相關(guān)成纖維細(xì)胞(cancer-associated?fibroblasts,caf),是在腫瘤微環(huán)境中發(fā)現(xiàn)的特定類型的成纖維細(xì)胞。間質(zhì)成纖維細(xì)胞因其在腫瘤生長、侵襲和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用而受到廣泛關(guān)注。caf負(fù)責(zé)產(chǎn)生旁分泌生長因子、蛋白水解酶和ecm成分。194、根據(jù)本發(fā)明,由式1或式2表示的喜樹堿類藥物是一種能夠穿透細(xì)胞膜的疏水性小分子,因此能夠深入腫瘤組織并以高濃度積累,穿透細(xì)胞膜在細(xì)胞內(nèi)部發(fā)揮細(xì)胞毒性。使細(xì)胞凋亡后釋放出來,還可持續(xù)性地穿透細(xì)胞膜并移入細(xì)胞內(nèi),并作用于周圍細(xì)胞。在這種情況下,周圍細(xì)胞殺傷效果較高,治療異質(zhì)性腫瘤可能具有優(yōu)勢(shì),但根據(jù)情況,為了提供用于緩解或預(yù)防自身免疫疾病的一種ild等基于喜樹堿類有效負(fù)載的adc毒性的接近方式(modality),為了使由adc釋放的喜樹堿類有效負(fù)載對(duì)癌細(xì)胞周圍的成纖維細(xì)胞不發(fā)揮周圍細(xì)胞殺傷效果,可以從包括式1的活性喜樹堿衍生物的各種候選組來設(shè)計(jì)/選擇例如不滲透成纖維細(xì)胞的細(xì)胞膜、或ic50高、或通過淋巴引流(drainage)快速消除而無法以高濃度積累的有效負(fù)載。進(jìn)而,適當(dāng)應(yīng)用其劑量-劑量,由此可精確控制所需功效(例如,抗癌、聯(lián)合療法)以及副作用(慢性癌癥抗原暴露、耐藥性、ild)。195、另外,本發(fā)明可從由式1或式2表示的喜樹堿類候選藥物組選擇adc的有效負(fù)載,以便在提高作為有效負(fù)載的喜樹堿類藥物的治療指數(shù)(therapeuticindex)的同時(shí),抑制從細(xì)胞凋亡的細(xì)胞釋放的喜樹堿類藥物和/或adc的非選擇性吸收(non-selective?uptake)。例如,在低濃度藥物(有效負(fù)載)中,從由式1或式2表示的候選藥物選擇靶癌細(xì)胞的殺傷效果高的喜樹堿類藥物,通過降低adc的有效負(fù)載的總濃度的adc給藥量,如圖26所示,可以抑制對(duì)由凋亡細(xì)胞釋放的游離性藥物(有效負(fù)載)的正常細(xì)胞的周圍細(xì)胞殺傷作用(by-standercell-killing現(xiàn)象),或者可以克服靶標(biāo)/非靶標(biāo)細(xì)胞凋亡的細(xì)胞釋放的游離型喜樹堿類藥物(有效負(fù)載)的脫靶效應(yīng)(off-target?toxicity)。196、[具有fl118藥物(式1-1)-酸敏感性(acid-sensitive)接頭的adc]197、本發(fā)明人使用式1-1的fl118合成了新型adc,所述式1-1的fl118是具有優(yōu)異的體外/體內(nèi)抗腫瘤功效和優(yōu)異的安全性屬性的新型喜樹堿有效負(fù)載(實(shí)施例4)。fl118有效負(fù)載表現(xiàn)出與戈沙妥珠單抗的有效負(fù)載sn-38相似的安全性屬性,因此在小鼠模型和猴子模型上證實(shí),在腫瘤微環(huán)境中具有非常有效的釋放屬性的cl2a接頭系統(tǒng)在應(yīng)用時(shí)不會(huì)引起嚴(yán)重的毒性。此外,經(jīng)確認(rèn),使用親水性cl2a接頭系統(tǒng),盡管fl118本身具有極度的疏水性,但可以確保adc的最小聚集。198、具體而言,如圖3所示,pbx-001是一種adc,由人源化抗trop2單克隆抗體hrs7、新型拓?fù)洚悩?gòu)酶i抑制物fl118以及cl2a接頭系統(tǒng)組成。pbx-001的dar較高,約為7~8,在低ph值的腫瘤微環(huán)境中可以非常高效地釋放fl118有效負(fù)載。如圖11至圖13所示,pbx-001的體外/體內(nèi)評(píng)估顯示出比戈沙妥珠單抗(trodelvy)更好的功效。此外,非人類靈長類毒性研究結(jié)果也證明pbx-001的安全性較好。199、基于此,在本發(fā)明中,為了提出能夠使用替代單克隆抗體轉(zhuǎn)換到其他靶標(biāo)的基于fl118的adc平臺(tái),在sacituzumab?fl118(pbx-001)(由人源化抗-trop2單克隆抗體hrs7組成的adc)中,使用人源化抗-egfr單克隆抗體h-r3來替代人源化抗-trop2單克隆抗體hrs7,重新設(shè)計(jì)了由拓?fù)洚悩?gòu)酶i抑制物fl118和cl2a接頭系統(tǒng)組成的adc,即nimotuzumab?fl118(具有nimotuzumab-cl2a-fl118的adc)(實(shí)施例4)。200、即,對(duì)于正常細(xì)胞分布較多,很難開發(fā)成adc的target之一的egfr,利用binding親和力(affinity)較低的抗體藥物nimotuzumab,以替代現(xiàn)有的抗體藥物cetuximab,來制備了adc,由此,旨在開發(fā)降低on?target?toxicity的egfr?target的adc。201、cetuximab的kd值(kd?value)為1.8*10-9m,而nimotuzumab的kd值(kd?value)為2.9*10-8m。202、實(shí)施例4及圖22是使用nimotuzumab-cl2a-fl118(egfr?target的新adc)的合成方法和兩種cetuximab、nimotuzumab的adc的in?vivo評(píng)估結(jié)果。203、盡管為了解決毒性問題而設(shè)計(jì)了nimotuzumab-cl2a-fl118,但令人驚訝的是,發(fā)現(xiàn)與作為對(duì)照組(reference)的cetuximab-cl2a-fl118相比,nimotuzumab-cl2a-fl118表現(xiàn)出更優(yōu)異的in?vivo效力(圖22)。在圖18至圖20的adc?in?vitro?assay中,根據(jù)預(yù)想,兩個(gè)adc顯示出相似的效力,但雖然預(yù)計(jì)cetuximab-cl2a-fl118會(huì)顯示出稍微更優(yōu)異的效力,然而in?vivo?assay獲得了出乎意料的結(jié)果(圖22)。204、本發(fā)明的免疫綴合物通過使用酸敏感性接頭,在抗原結(jié)合之后,不僅在癌細(xì)胞內(nèi)部,而且在癌組織周圍也有效釋放喜樹堿類藥物,從而可克服與adc處理相關(guān)的耐藥性機(jī)制(圖3)。205、因此,本發(fā)明的一個(gè)具體例涉及包含[式1的fl118藥物]-[酸敏感性(acid-sensitive)接頭]-[尼妥珠單抗(nimotuzumab)或其含抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段]的免疫綴合物,206、(i)通過酸敏感性接頭,至少一個(gè)式1的fl118藥物連接到尼妥珠單抗(nimotuzumab)或其含抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段,207、(ii)經(jīng)靶向癌細(xì)胞的egfr抗原的抗原結(jié)合位點(diǎn)靶向癌細(xì)胞后,酸敏感性接頭在癌癥周圍酸性氣氛(ph≤7)下被降解,至少部分式1的fl118藥物游離,游離型式1的fl118藥物穿過細(xì)胞膜移動(dòng)至細(xì)胞內(nèi),208、(iii)式1的fl118藥物通過抑制外排泵(efflux?pump)的作用,使細(xì)胞內(nèi)游離型式1的fl118藥物豐富(enrichment),209、(iv)選擇性地(optionally),可能是連接有式1的fl118藥物的免疫綴合物內(nèi)化(internalization)到細(xì)胞中,從溶酶體(lysosomes)游離式1的fl118藥物。210、[受體-配體結(jié)合和解離常數(shù)kd]211、根據(jù)本發(fā)明,在如下抗體或其含抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段中,細(xì)胞表面蛋白的抗原表位和抗體或其含抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段之間的結(jié)合相當(dāng)于一種受體-配體結(jié)合:抗體或其含抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段(b-1),在對(duì)細(xì)胞表面蛋白的抗原表位的解離常數(shù)kd值(value)為1*10-8m以上且小于1*10-6m;或者抗體或其含抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段(b-2),其與在正常細(xì)胞和癌細(xì)胞中均表達(dá)的細(xì)胞表面蛋白結(jié)合,當(dāng)以二價(jià)而不是一價(jià)結(jié)合細(xì)胞表面蛋白的抗原表位時(shí),結(jié)合親和力更高。212、其中,解離常數(shù)kd是可以定量測定配體結(jié)合(對(duì)應(yīng)于抗體結(jié)合)的強(qiáng)度的尺度。213、多細(xì)胞有機(jī)體的所有細(xì)胞都必須從其他細(xì)胞接收信號(hào)并作出反應(yīng),以了解生長、分裂、分化、連接、分散或死亡時(shí)間。細(xì)胞需要通過膜結(jié)合受體或胞內(nèi)受體接收分子信號(hào),將接收到的信號(hào)轉(zhuǎn)化為有意義的細(xì)胞反應(yīng),如細(xì)胞分裂或分化。214、受體與其識(shí)別(matching)配體(its?cognate(matching)ligand)之間的結(jié)合相互作用(binding?interaction)后,反應(yīng)的細(xì)胞應(yīng)將該受體-配體相互作用的知識(shí)(knowledge)傳達(dá)給能夠引起適當(dāng)細(xì)胞反應(yīng)的分子信號(hào)通路的成員。這個(gè)過程叫做信號(hào)傳達(dá)。信號(hào)傳達(dá)通路的最終結(jié)果是反應(yīng)細(xì)胞的行為變化(behavior?of?the?respondingcell)。這些變化是受體與配體相遇的結(jié)果(或與其反應(yīng))的總體表現(xiàn),可能包括細(xì)胞分裂、分化、遷移、代謝狀態(tài)變化、表面或細(xì)胞質(zhì)分子表達(dá)變化、分泌趨化因子或細(xì)胞因子等新化合物的分泌等組合。215、酶-基質(zhì)結(jié)合相互作用一般為1價(jià)(一個(gè)酶分子結(jié)合一個(gè)底物分子),親和力中等,只有少數(shù)酶能與任意一種底物相互作用。相比之下,抗原和受體分子之間的相互作用可能具有非常高的親和力,并且能夠識(shí)別特定抗原的受體多樣性是驚人的。216、受體分子通過與酶和底物結(jié)合時(shí)使用的相同類型的非共價(jià)化學(xué)鍵附著到配體。其中,包括氫鍵和離子鍵、疏水性以及范德華相互作用。有意義的受體-配體相互作用的關(guān)鍵在于能夠在細(xì)胞接收分子信號(hào),該分子信號(hào)表示的是,結(jié)合相互作用的總和以足夠的結(jié)合能一起維持兩個(gè)相互作用表面,并在足夠的時(shí)間內(nèi)受體與匹配的配體結(jié)合。這種非共價(jià)相互作用個(gè)別較弱,因此需要這些許多相互作用來形成生物相關(guān)受體-配體連接。此外,這些各個(gè)非共價(jià)相互作用僅在非常短的距離(通常,約1埃(米))工作,因此高親和力受體-配體相互作用根據(jù)受體與配體之間的非常近的“相容性(fit)”或互補(bǔ)性(complementarity)程度而不同。水性環(huán)境(aqueous?environment)中,非共價(jià)相互作用較弱,依賴于受體和配體形狀的密切互補(bǔ)性。217、總之,多重非共價(jià)鍵可使受體-配體相互作用激活分子反應(yīng),因此可實(shí)現(xiàn)足夠的結(jié)合能和相互作用時(shí)間。218、本發(fā)明的免疫綴合物通過抗原結(jié)合位點(diǎn),與目標(biāo)細(xì)胞的表面蛋白的抗原表位結(jié)合,因此,即使在通過所謂受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用(receptor-mediated?endocytosis)的過程來使免疫綴合物與有效負(fù)載藥物一起內(nèi)化(internalize)到細(xì)胞內(nèi)時(shí),也遵循如上所述的受體-配體相互作用/結(jié)合相關(guān)化學(xué)規(guī)則(the?rules?of?chemistry)。219、識(shí)別癌細(xì)胞的抗原的抗體需要與藥物一起,通過受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用(receptor-mediated?endocytosis)引起細(xì)胞內(nèi)化。為了在癌細(xì)胞中提高細(xì)胞內(nèi)化,正在開發(fā)雙重特異性抗體(bispecific?antibody)。220、美國醫(yī)學(xué)免疫公司(medimmune)和英國阿斯利康公司(astrazeneca)正在開發(fā)的medi4267(trastuzumab-meta)表現(xiàn)出的是,在her2中靶向兩個(gè)非重疊抗原表位的雙表位雙特異性抗體(biparatopic?antibody)誘導(dǎo)her2受體聚集,并由此促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)化、溶酶體trafficking以及降解。221、受體結(jié)合位點(diǎn)(receptor?binding?site)(s)與配體(l)之間的結(jié)合相互作用的強(qiáng)度可使用下式描述:222、式:kd=[s][l]/[sl]223、其中,反應(yīng)的解離常數(shù)kd定義了受體-配體對(duì)的濃度[sl]和游離受體位點(diǎn)濃度[s]和游離配體濃度[l]的乘積之間的關(guān)系。解離常數(shù)的單位為摩爾數(shù)(m)。kd越低,相互作用的親和力越高。當(dāng)占據(jù)結(jié)合位點(diǎn)的50%時(shí),[sl]=[s],kd=游離配體的濃度。224、解離常數(shù)kd是能夠定量測定配體結(jié)合的強(qiáng)度的尺度。kd越低,相互作用的親和力越高。當(dāng)游離配體的濃度等于kd時(shí),配體的50%與受體結(jié)合。225、例如,在圖17中,bc50表示binding?concentration?at?50%maximum。226、為了比較,許多酶-底物相互作用的kd值在10-3~10-5m范圍內(nèi),這與免疫反應(yīng)初期親和力較低的抗原-抗體相互作用的kd值相似。227、但是,在初始抗原刺激表達(dá)的抗體基因在免疫反應(yīng)進(jìn)行過程中發(fā)生突變并被選擇,因此,免疫反應(yīng)后期的抗原-抗體相互作用的kd可能會(huì)降低至10-12m。這是一種非常強(qiáng)的相互作用,即使抗原濃度低至10-12m,一半的抗原分子也與受體完全結(jié)合。根據(jù)近期對(duì)先天性醇樣受體的研究,這種受體與每個(gè)配體之間的相互作用的kd在10-7~10-8m范圍內(nèi)。228、受體-配體相互作用的親和力可通過平衡透析(equilibrium?dialysis)或表面等離子共振(spr)測定。229、受體與配體之間的相互作用可以是多價(jià)(multivalent)。230、包括b細(xì)胞受體的許多生物受體,每個(gè)分子具有至少一個(gè)配體結(jié)合位點(diǎn),因此被表征為多價(jià)。受體和配體均為2價(jià)時(shí)(例如2價(jià)b細(xì)胞受體與細(xì)菌表面上的兩個(gè)相同配體結(jié)合時(shí)),整體結(jié)合相互作用(the?overallbindinginteraction)相同,但與1價(jià)受體與配體之間相互作用相比顯著更強(qiáng)(但是,通過一個(gè)分子的兩個(gè)相同受體位點(diǎn),與相同細(xì)胞的兩個(gè)相同配體結(jié)合的強(qiáng)度可能略低于通過單個(gè)受體位點(diǎn)結(jié)合的強(qiáng)度的兩倍。這是因?yàn)椋?價(jià)結(jié)合可能會(huì)或多或少修飾受體或配體的幾何結(jié)構(gòu),從而能夠輕微干擾個(gè)別相互作用的“相同性”。)。231、2價(jià)結(jié)合的很多優(yōu)點(diǎn)來自非共價(jià)鍵相互作用本質(zhì)是可逆的事實(shí)。配體在與受體結(jié)合的時(shí)間之中打發(fā)一部分時(shí)間,一部分時(shí)間是以未結(jié)合的狀態(tài),“關(guān)閉”狀態(tài)下打發(fā)時(shí)間。當(dāng)涉及兩個(gè)以上結(jié)合位點(diǎn)時(shí),所有受體位點(diǎn)同時(shí)成為“關(guān)閉”狀態(tài)的可能性小,因此受體釋放配體的可能性就小。圖28中比較1價(jià)相互作用(a)和2價(jià)相互作用(b)。在圖28(a)中,當(dāng)1價(jià)受體接近多價(jià)抗原時(shí),受體與配體(用紅圈表示)處于平衡狀態(tài),一部分時(shí)間處于結(jié)合狀態(tài)(結(jié)合為“打開”狀態(tài)),一部分時(shí)間處理解除結(jié)合狀態(tài)(結(jié)合為“關(guān)閉”狀態(tài))。處于“打開”狀態(tài)和“關(guān)閉”狀態(tài)的時(shí)間之比確定受體-配體相互作用的親和力,并且與受體與配體之間的非共價(jià)鍵相互作用的共識(shí)強(qiáng)度相關(guān)。在圖28(b)中,當(dāng)一個(gè)位點(diǎn)瞬間釋放配體時(shí),2價(jià)或多價(jià)結(jié)合與1價(jià)結(jié)合一樣,有助于確保兩個(gè)分子(或?qū)嶋H上是兩個(gè)細(xì)胞)之間的相互作用沒有損失。232、抗體親和力(avidity)這一術(shù)語用于說明多價(jià)結(jié)合中產(chǎn)生的集體結(jié)合相互作用(collective?binding?interactions)的整體強(qiáng)度(the?overall?strength?of?thecollective?bindinginteractions?that?occur?during?multivalent?binding)。233、由于細(xì)胞膜流動(dòng)性特性,大部分的膜結(jié)合抗原受體在個(gè)別受體分子基本上為1價(jià)的情況下也作用成多價(jià)方式。234、圖29是細(xì)胞表面受體與多價(jià)抗原結(jié)合形成簇的概念圖。(a)細(xì)胞表面的受體例如當(dāng)在細(xì)菌細(xì)胞表面遇到多價(jià)排列的配體時(shí),(b)受體在膜的平面上移動(dòng)形成占有受體簇。即,圖29顯示以可逆的方式與膜結(jié)合受體相互作用的多價(jià)抗原在細(xì)胞膜逐漸使?jié)u漸增大的受體簇穩(wěn)定的方法。235、這是因?yàn)?,?dāng)形成一個(gè)或兩個(gè)穩(wěn)定連接時(shí),細(xì)胞膜的流動(dòng)環(huán)境中隨機(jī)擴(kuò)散的其他受體被受體簇捕獲,由此變大。這些受體簇在細(xì)胞質(zhì)側(cè)促進(jìn)分子內(nèi)相互作用,以使細(xì)胞激活信號(hào)傳導(dǎo)至細(xì)胞核中。236、總之,與1價(jià)結(jié)合相互作用相比,多價(jià)結(jié)合相互作用偏好增加,導(dǎo)致配體在受體占據(jù)的時(shí)間變長。1價(jià)受體也能夠在與膜結(jié)合多價(jià)配體相互作用時(shí)形成多價(jià)簇。即使在細(xì)胞表面蛋白中抗原表位是1價(jià),在使用2價(jià)抗體的本發(fā)明的免疫綴合物的情況下也可形成多價(jià)簇。237、與癌細(xì)胞一樣,當(dāng)細(xì)胞被激活時(shí),受體表達(dá)模式會(huì)發(fā)生變化,從而導(dǎo)致對(duì)特定信號(hào)的反應(yīng)性升高或降低。當(dāng)考慮到受體與配體之間的相互作用的強(qiáng)度時(shí),重要的是考慮引起這種相互作用的解剖環(huán)境(例如,腫瘤組織的ph、實(shí)體癌、冷腫瘤/熱腫瘤(cold?tumor/hottumor))。238、免疫抗原受體可以是跨膜型、細(xì)胞質(zhì)型或分泌型(如抗體)。239、對(duì)于大多數(shù)生物學(xué)家而言,“受體”一詞會(huì)讓人想到跨膜蛋白質(zhì),會(huì)誠實(shí)地等待水溶性配體擴(kuò)散至周圍以響應(yīng)配體的信號(hào)。240、相關(guān)與此,親和力低,低濃度抗體無法與抗原結(jié)合。因此,具有如下抗體或其含抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段的本發(fā)明的免疫抗癌藥物可滲透至癌組織深部:抗體或其含抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段(b-1),對(duì)細(xì)胞表面蛋白的抗原表位的解離常數(shù)kd值(value)為1*10-8m以上且小于1*10-6m;或者抗體或其含抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段(b-2),其與在正常細(xì)胞和癌細(xì)胞中均表達(dá)的細(xì)胞表面蛋白結(jié)合,當(dāng)以二價(jià)而不是一價(jià)結(jié)合細(xì)胞表面蛋白的抗原表位時(shí),結(jié)合親和力更高。241、關(guān)于抗體的抗原結(jié)合親和力(binding?affinity),含抗體免疫球蛋白的折疊由一對(duì)β折疊組成,該一對(duì)β折疊通過由定義蛋白質(zhì)結(jié)合特異性的環(huán)連接而成的β鏈形成。242、在抗體中,各個(gè)免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域形成具有二硫鍵的特征間隔(約67個(gè)氨基酸分離出兩個(gè)半胱氨酸殘基)的氨基酸結(jié)構(gòu)域環(huán)。大多數(shù)免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域包含約110個(gè)氨基酸,各個(gè)β折疊由3~6條鏈組成。各個(gè)結(jié)構(gòu)域中一對(duì)β折疊通過鏈內(nèi)二硫鍵穩(wěn)定。相鄰結(jié)構(gòu)域由相對(duì)未結(jié)構(gòu)化的多肽鏈相互連接。243、在每個(gè)免疫球蛋白(ig)結(jié)構(gòu)域內(nèi),多個(gè)β鏈平行排列以形成一對(duì)β折疊。沿著各個(gè)β鏈的氨基酸序列,疏水性氨基酸和親水性氨基酸交替排列,使一個(gè)片段的疏水性氨基酸朝向相反側(cè)片段的氨基酸,親水性殘基與環(huán)境相互作用。因此,兩個(gè)β折疊形成非常穩(wěn)定的“疏水性夾層”,每個(gè)結(jié)構(gòu)域通過折疊之間的疏水性相互作用來穩(wěn)定,整個(gè)蛋白質(zhì)顯著溶解。244、免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域由排列在通過可變環(huán)連接的β折疊的氨基酸殘基組成。兩個(gè)β褶皺片由兩種藍(lán)色陰影表示。它們借助疏水性相互作用和儲(chǔ)存的二硫鍵(未示出)來固定。用紅色示出的每個(gè)可變結(jié)構(gòu)域的三個(gè)環(huán)在長度和氨基酸序列上差異很大,并構(gòu)成抗原結(jié)合位點(diǎn)。因此,這被稱為互補(bǔ)性確定區(qū)域(cdr)。245、抗體重鏈包含4個(gè)或5個(gè)結(jié)構(gòu)域,而輕鏈僅包含2個(gè)。在每種情況下,抗原結(jié)合功能位于蛋白質(zhì)的氨基酸(n)-末端結(jié)構(gòu)域內(nèi)。246、[egfr靶標(biāo)抗體-藥物綴合物(egfr?targeting?antibody-drug?conjugate)]247、屬于受體酪氨酸激酶erbb家族的表皮生長因子受體(egfr)在各種實(shí)體腫瘤中對(duì)腫瘤形成起到核心作用。248、在非小細(xì)胞肺癌(nsclc)、結(jié)腸癌(crc)、頭頸鱗狀上皮細(xì)胞癌(hnscc)以及膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者中經(jīng)常發(fā)現(xiàn)egfr突變和/或上調(diào)。用酪氨酸激酶抑制物(tki)或單克隆抗體(mab)抑制egfr活化、抑制腫瘤生長并提高患者存活率方面取得巨大臨床成功。249、但是,反應(yīng)初期之后,疾病進(jìn)展似乎是不可避免的,這可能是原發(fā)性或獲得性抵抗機(jī)制引起的,例如egfr二次或三次突變、egfr信號(hào)的下游介質(zhì)突變或rtk信號(hào)旁路。目前,克服對(duì)egfr靶向治療藥物的耐藥性是在癌癥治療中臨床難題,也是醫(yī)學(xué)需求未得到圓滿的一個(gè)大課題。250、相關(guān)與此,本發(fā)明的免疫綴合物可解決上述難題的egfr靶向治療藥物,所述免疫綴合物是降解ddx5蛋白的喜樹堿類藥物(a)通過接頭(c)與如下抗體或其含抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段結(jié)合:抗體或其含抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段(b-1),對(duì)egfr蛋白的抗原表位的解離常數(shù)kd值(value)為1*10-8m以上且小于1*10-6m;或者抗體或其含抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段(b-2),當(dāng)以二價(jià)而不是一價(jià)結(jié)合egfr蛋白的抗原表位時(shí),結(jié)合親和力更高。251、抗體-藥物綴合物(adc)是將細(xì)胞毒性有效負(fù)載選擇性地遞送至使用抗體表達(dá)高水平腫瘤相關(guān)抗原的腫瘤的新型藥物。通過在腫瘤中局部積累毒素來最大限度地減少全身毒性并增加癌細(xì)胞死亡,從而提供高于化療或母源抗體的治療指數(shù)。此外,adc為了誘導(dǎo)獨(dú)立于抑制致癌信號(hào)機(jī)制的細(xì)胞凋亡,并向癌細(xì)胞選擇性地遞送抗絲粒細(xì)胞或dna損傷毒素(anti-mitotic?or?dna?damaging?toxins),從而可繞過部分耐藥機(jī)制。最近,靶向egfr變異iii的兩種adc(amg-595和abt-414)在復(fù)發(fā)性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者中證明了有潛力的單獨(dú)治療功效,但這種反應(yīng)與egfr擴(kuò)增或egfrviii的存在相關(guān),為egfr擴(kuò)增或變異癌癥患者提供egfr靶標(biāo)adc的早期臨床驗(yàn)證。252、尼妥珠單抗(還已知為hr3的人源化igg1)是許多發(fā)展中國家批準(zhǔn)的非小細(xì)胞肺癌和腦膠質(zhì)瘤治療藥物的egfr靶標(biāo)抗體。對(duì)egfr陽性癌細(xì)胞的hr3的卓越選擇性(selectivity)在增強(qiáng)癌細(xì)胞凋亡的同時(shí),使正常組織毒性最小化,并提供能夠設(shè)計(jì)治療抗-egfr治療失敗的患者的基于hr3的adc的強(qiáng)有力的依據(jù)。253、尼妥珠單抗還在進(jìn)行用于治療多種實(shí)體腫瘤的臨床試驗(yàn),包括非小細(xì)胞肺癌、crc、胃癌以及胰腺癌。由于與egfr受體的獨(dú)特結(jié)合動(dòng)力學(xué)(unique?binding?kineticswith?egfr?receptor),人類中與hr3相關(guān)的副作用僅僅為從輕度到中度的嚴(yán)重程度。特別是,患者中的嚴(yán)重痤瘡性皮疹和胃腸道粘膜毒性發(fā)生率非常低,這些副作用是通常限制egfr靶向治療藥物中觀察到的毒性的水平。254、尼妥珠單抗對(duì)應(yīng)于egfr蛋白的抗原表位的解離常數(shù)kd值(value)為1*10-8m以上且小于1*10-6m的抗體(b-1);或者當(dāng)以二價(jià)而不是一價(jià)結(jié)合egfr蛋白的抗原表位時(shí),結(jié)合親和力更高的抗體(b-2)。255、抑制egfr介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)已被證明對(duì)特定類型的癌癥治療是有效的,但隨著恢復(fù)egfr信號(hào)或激活促進(jìn)惡性細(xì)胞的增殖和存活的替代通路的機(jī)制快速進(jìn)化,抑制egfr功能的接近方法的功效和有用性受到限制。當(dāng)考慮到很多癌癥中經(jīng)常觀察到egfr的過表達(dá)時(shí),無關(guān)于egfr介導(dǎo)的信號(hào)阻斷,egfr靶標(biāo)抗體-藥物綴合物(adc)可選擇性地殺死癌細(xì)胞。256、[kd值(value)為1*10-8m以上且小于1*10-6m,或當(dāng)以2價(jià)而不是1價(jià)結(jié)合時(shí)結(jié)合親和力更高的抗體或其含抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段(b)]257、在本發(fā)明的免疫綴合物中,優(yōu)選使用如下抗體或其含抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段:抗體或其含抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段(b-1),對(duì)細(xì)胞表面蛋白的抗原表位的解離常數(shù)kd值(value)為1*10-8m以上且小于1*10-6m;或者抗體或其含抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段(b-2),其與在正常細(xì)胞和癌細(xì)胞中均表達(dá)的細(xì)胞表面蛋白結(jié)合,當(dāng)以二價(jià)而不是一價(jià)結(jié)合細(xì)胞表面蛋白的抗原表位時(shí),結(jié)合親和力更高。258、與在正常細(xì)胞和癌細(xì)胞中均表達(dá)的細(xì)胞表面蛋白結(jié)合,當(dāng)以二價(jià)而不是一價(jià)結(jié)合細(xì)胞表面蛋白的抗原表位時(shí),結(jié)合親和力更高的抗體或其含抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段(b-2)的非限制性示例,如圖2所示的生長因子,包括正常細(xì)胞和癌細(xì)胞中均表達(dá)的細(xì)胞表面蛋白特別是癌細(xì)胞中配對(duì)時(shí)結(jié)合的抗體。259、因此,當(dāng)以二價(jià)而不是一價(jià)結(jié)合細(xì)胞表面蛋白的抗原表位時(shí)結(jié)合親和力更高的抗體,如癌細(xì)胞,可以靶向細(xì)胞被激活時(shí)表達(dá)模式會(huì)發(fā)生變化的細(xì)胞表面蛋白。260、[與在正常細(xì)胞和癌細(xì)胞中均表達(dá)的細(xì)胞表面蛋白結(jié)合,當(dāng)以二價(jià)而不是一價(jià)結(jié)合細(xì)胞表面蛋白的抗原表位時(shí)結(jié)合親和力更高的抗體],與尼妥珠單抗一樣,可能是[2價(jià)結(jié)合egfr抗原表位的(bound?bivalently?to?egfr?epitopes)抗體]或者binding親和力(affinity)較小。261、尼妥珠單抗(mab)的降低的副作用與固有結(jié)合親和力(binding?affinity)和密度依賴性(density?dependence)有關(guān)。尼妥珠單抗與egfr之間的低親和力允許低于毒性劑量的最佳藥物劑量。262、根據(jù)數(shù)學(xué)模型預(yù)測,為了使正常細(xì)胞毒性最小化并使腫瘤細(xì)胞靶向最大化,抗-egfr?mab的結(jié)合親和力(kd)必須在10-8m-10-9m范圍內(nèi)[crombet?t,osorio?m,cruz?t,etal.use?of?the?humanized?anti-epidermal?growth?factor?receptor?monoclonalantibody?h-r3?in?combination?with?radiotherapy?in?the?treatment?oflocallyadvanced?head?and?neck?cancer?patients.j?clin?oncol?2004;22(9):1646-54]。尼妥珠單抗屬于該范圍,但西妥昔單抗和帕尼單抗(cetuximab?and?panitumumab)的結(jié)合力強(qiáng)10倍。根據(jù)最近提出的密度模型,尼妥珠單抗與egfr抗原表位臨時(shí)1價(jià)結(jié)合,并強(qiáng)烈地以2價(jià)結(jié)合,該屬性進(jìn)一步說明尼妥珠單抗的減少的副作用。在正常細(xì)胞(例如皮膚上皮細(xì)胞)中egfr表達(dá)對(duì)于引起尼妥珠單抗2價(jià)結(jié)合方面上過低,從而限制mab的功效并避免不必要的毒性。反之,過表達(dá)的腫瘤細(xì)胞具有足夠的用于強(qiáng)烈抑制尼妥珠單抗與2價(jià)結(jié)合的受體密度。該理論基礎(chǔ)在于,尼妥珠單抗(nimotuzumab)比西妥昔單抗(cetuximab)表現(xiàn)出更少結(jié)合的正常皮膚和腎臟細(xì)胞的nimotuzumab和cetuximab的比較劑量結(jié)合曲線[garrido?g,rabasaa,gracia?e,et?al.binding?properties?of?the?anti-egfr?monoclonal?antibody,nimotuzumab,limit?its?interaction?with?the?egfrin?renal?and?epidermalcells.aacr?100th?annual?meeting,2009(abstract?2763).available?from:http://www.ymbiosciences.com/upload_files/nimo_poster_aacr2009.pdf?[last?accessed22june?2009]]。263、[具有kd值(value)為1*10-8m以上且小于1*10-6m或當(dāng)以2價(jià)而不是1價(jià)結(jié)合時(shí)結(jié)合親和力更高的抗體或其含抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段(b)的免疫抗癌藥物的優(yōu)點(diǎn)]264、根據(jù)本發(fā)明,具有kd值(value)為1*10-8m以上且小于1*10-6m,或當(dāng)以2價(jià)而不是1價(jià)結(jié)合時(shí)結(jié)合親和力更高的抗體或其含抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段(b)的免疫抗癌藥物可緩解癌癥微環(huán)境內(nèi)固體壓力,從而增加抗癌藥物和/或免疫治療藥物的可及性,因此可提高治療效果。265、傳統(tǒng)上,癌癥被認(rèn)為是調(diào)節(jié)細(xì)胞的分裂、分化以及凋亡的基因發(fā)生突變而發(fā)生的細(xì)胞遺傳疾病,但最近,已知癌癥微環(huán)境也參與了癌癥的發(fā)行、進(jìn)行、逃避免疫監(jiān)視、治療反應(yīng)等,并備受關(guān)注。癌細(xì)胞增殖的同時(shí),生化、物理、機(jī)械地改變周圍環(huán)境的結(jié)構(gòu)和功能。最終,這些物理變性對(duì)癌細(xì)胞和微環(huán)境都有影響,促進(jìn)癌癥的進(jìn)展或?qū)χ委煯a(chǎn)生耐藥性。266、癌癥的8種典型特性如下:1.持續(xù)性細(xì)胞分裂信號(hào);2.逃避生長抑制信號(hào);3.抵抗細(xì)胞凋亡;4.無限細(xì)胞分裂;5.促進(jìn)血管生成;6.激活組織侵襲和轉(zhuǎn)移;7.能量代謝活動(dòng)的變化;以及8.避免免疫破壞。267、隨著癌癥生長,使周圍組織生化和物理變形,這些變形會(huì)誘發(fā)能夠影響癌細(xì)胞和周圍微環(huán)境的物理畸形。268、基于癌癥的物理畸形的4種附加特征如下:(i)固體壓力和彈性能量;(ii)間質(zhì)液壓迫;(iii)堅(jiān)固性(彈性);(iv)基質(zhì)結(jié)構(gòu)。269、這4種特征在概念上是單獨(dú)的,但可以相互產(chǎn)生協(xié)同作用,可進(jìn)行相互作用,同時(shí)惡化現(xiàn)有的8種癌癥的生物學(xué)特征,從而可促進(jìn)癌細(xì)胞的分裂、轉(zhuǎn)移、逃避免疫監(jiān)視、治療耐藥性等。270、關(guān)于固體壓力和彈性能量,也被稱為“殘余應(yīng)力(residualstresses)”的固體壓力(solid?stresses)是指機(jī)械力,例如壓縮力(compressive)、拉伸力(tensile)、剪切變形力(shear)等,并內(nèi)在于細(xì)胞或細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular?matrix)的固體彈性要素中,或在要素之間傳遞。固體壓力的大小用帕斯卡(pa)或毫米汞柱(mmhg)表示,從約0.7mmhg的膠質(zhì)細(xì)胞瘤(glioblastoma)至75mmhg胰腺管細(xì)胞癌(pancreatic?ductal?adenocarcinoma)分布廣泛。271、癌癥中引發(fā)固體壓力的各種機(jī)制如下。272、(1)細(xì)胞分裂、細(xì)胞滲透以及基質(zhì)沉積導(dǎo)致的組織體積增加273、這樣增加的體積會(huì)擠出存在于癌組織內(nèi)外的粘彈性結(jié)構(gòu)(viscoelasticstructures),對(duì)癌癥和周圍組織產(chǎn)生固體壓力。因此,若抗癌治療導(dǎo)致癌細(xì)胞數(shù)量減少,則固體壓力減小,施加于癌組織周圍血管的壓力也會(huì)減小。274、(2)癌組織周圍正常組織的變形275、有些癌癥以被良好抑制的狀態(tài)生長為結(jié)節(jié)性團(tuán)塊,這些癌癥與周圍正常組織共存,并擠出周圍正常組織以增加機(jī)械壓力。另一方面,某些癌癥會(huì)挑選周圍正常組織的脆弱部分來滲透,并與正常組織混在一起生長,這種情況下,會(huì)產(chǎn)生比前者更弱的固體壓力。276、(3)水分吸收引起的浮腫277、透明質(zhì)酸(hyaluronic?acid)等基質(zhì)中的負(fù)荷多糖類因滲透壓而增加水分含量,這種癌組織內(nèi)增加的水分引發(fā)不同于液壓的其他形式的固體壓力。278、(4)肌動(dòng)球蛋白(actomyosin)引起的細(xì)胞收縮279、成纖維細(xì)胞(fibroblasts)、免疫細(xì)胞以及癌細(xì)胞在癌組織中移動(dòng)或想要修復(fù)受損的組織時(shí),可收縮基質(zhì)。細(xì)胞收縮會(huì)產(chǎn)生用于收縮細(xì)胞外基質(zhì)的拉伸力,并在部分癌組織中誘發(fā)張力,這將壓迫其他部分以形成平衡。280、1997年首次報(bào)道,固體壓力能夠抑制癌癥生長,這種物理力量大到能夠壓迫周圍血管或淋巴管的程度,因此,若血流流入減少,則可能誘發(fā)缺氧(hypoxia),促進(jìn)癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移,或者還可阻止抗癌藥物或免疫治療藥物的接近。癌細(xì)胞和正常細(xì)胞具有可感知從外部施加的物理力量的機(jī)械刺激反應(yīng)系統(tǒng),直接對(duì)細(xì)胞-細(xì)胞外基質(zhì)或細(xì)胞-細(xì)胞之間的力做出反應(yīng),或者對(duì)借助固體壓力變形的細(xì)胞外基質(zhì)的變化做出間接反應(yīng)。281、在癌癥動(dòng)物模型中緩解固體壓力,從而減輕施加到血管的壓力,從而直接增加了抗癌藥物的可及性,并提高存活率。這種緩解固體壓力的接近法還可提高免疫治療等其他治療的效果。另外,從本發(fā)明的免疫綴合物釋放的有效負(fù)載可有效發(fā)揮旁觀者效應(yīng)(bystander?effect)。282、在大部分器官中,通過動(dòng)脈進(jìn)入的血液通過靜脈留出,部分殘留的組織液通過淋巴管排出,從而保持間質(zhì)液(interstitial?fluid)穩(wěn)態(tài),若是正常器官,就會(huì)產(chǎn)生幾乎接近0的間質(zhì)液壓力。若生成腫瘤,則由于滲透性增加的血管或施加于血管/淋巴管的壓迫,這種均衡將被打破。松弛的血管和變窄的排出管會(huì)導(dǎo)致組織內(nèi)間質(zhì)液的增加,這將導(dǎo)致間質(zhì)液壓力的增加。一直在癌組織內(nèi)保持預(yù)定水平的間質(zhì)液壓在腫瘤周圍位點(diǎn)急劇減少,從而形成從腫瘤中心部向有淋巴引流管的周圍正常組織側(cè)的組織液的流動(dòng)。283、這種間質(zhì)液的流動(dòng)對(duì)血管外細(xì)胞施加剪切應(yīng)力(shear?stress),剪切應(yīng)力(shearstress)會(huì)對(duì)癌細(xì)胞和周圍細(xì)胞誘發(fā)如下變化:激活纖維細(xì)胞、調(diào)節(jié)血管/淋巴管的生成、調(diào)節(jié)基質(zhì)金屬蛋白水解酶(matrix?metalloproteinase,mmp)活性、調(diào)節(jié)癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移性、抑制細(xì)胞周期。另一方面,免疫細(xì)胞還能夠感知間質(zhì)液流動(dòng),因此這些組織液的流動(dòng)還參與免疫力調(diào)節(jié)。284、除直接調(diào)節(jié)機(jī)械信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制外,間質(zhì)液壓力差引起的組織液的流動(dòng)還參與癌癥進(jìn)展和對(duì)抗癌治療的反應(yīng)性。高間質(zhì)液壓力可以阻礙通過血管到達(dá)的抗癌藥物擴(kuò)散到癌組織側(cè),另外,從癌組織向血管/淋巴管側(cè)的間質(zhì)液流動(dòng)還有助于癌細(xì)胞通過血管或淋巴管擴(kuò)散到其他組織。285、由于累積的固體壓力在擠壓血管的同時(shí),干擾血液流動(dòng)并增加間質(zhì)液壓力,因此使用本發(fā)明的免疫綴合物以緩解固體壓力的方法也可以通過除去施加于血管/淋巴管的壓迫并改善血流流動(dòng),從而可保持正常水平的間質(zhì)液壓力。286、[接頭(c)]287、構(gòu)成adc的要素中,將抗體和細(xì)胞毒性藥物結(jié)合的是接頭。288、當(dāng)設(shè)計(jì)adc時(shí)重要的是,加強(qiáng)對(duì)目標(biāo)腫瘤細(xì)胞的特異性,確保血漿中的穩(wěn)定性,以降低對(duì)正常細(xì)胞的毒性的同時(shí),采用高效藥物,以提高腫瘤細(xì)胞殺傷效果。289、接頭應(yīng)對(duì)血流穩(wěn)定(stable),并防止藥物從抗體分離,在到達(dá)目標(biāo)之前保持前藥(prodrug)狀態(tài),最大限度地減少對(duì)正常組織的傷害。最理想的接頭是adc在全身循環(huán)時(shí)穩(wěn)定,并在靶細(xì)胞中被切割以適當(dāng)釋放細(xì)胞毒性藥物,使藥物安全遞送至靶標(biāo),從而使adc同時(shí)具有功效和安全性。290、用接頭將藥物結(jié)合到抗體時(shí),藥物不應(yīng)影響抗體的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性、基質(zhì)結(jié)合特性和藥物動(dòng)態(tài)。291、特別是,adc需要保持抗體與藥物結(jié)合之前的抗體相同的親和力。即,不應(yīng)因與抗體結(jié)合的藥物而影響抗體-抗原結(jié)合。292、降解ddx5蛋白的喜樹堿類藥物(a)由于高疏水性,并不是依賴于抗體的藥物靶而發(fā)生藥物吸收和有效負(fù)載釋放(release),而是為了減少巨噬細(xì)胞(macrophage)等發(fā)生非選擇性攝取(non-selective?uptake)而出現(xiàn)意想不到的副作用的副作用,因此接頭(c)優(yōu)選為親水性。293、用于adc的接頭根據(jù)切割能力分為非切割型和切割型。294、非切割型接頭具有相對(duì)較高的血漿穩(wěn)定性,并對(duì)蛋白水解具有抵抗力。非切割型接頭(non-cleavable?linker)中,硫醚(thioether)接頭就是代表性接頭。295、不同于切割型接頭,非切割型接頭的接頭本身不發(fā)生分解,因此具有以adc形式導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)之后,抗體分解才能進(jìn)行藥物釋放的特性。例如,導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)之后,抗體分解,藥物才能以接頭和復(fù)合物的形式釋放,該復(fù)合物具有藥物活性。296、這樣釋放的藥物在帶有電荷的情況下擴(kuò)散到周圍細(xì)胞(bystander?effect,旁觀者效應(yīng))的可能性很小。雖然沒有表現(xiàn)出對(duì)周圍細(xì)胞的毒性的旁觀者效應(yīng),但靶標(biāo)細(xì)胞內(nèi)化后僅在靶細(xì)胞中顯示出效果,因此這意味著安全性相對(duì)較高,并且可知通過非切割型接頭制備的adc更依賴于靶標(biāo)細(xì)胞內(nèi)生物機(jī)制。297、切割型接頭響應(yīng)特定環(huán)境要素而被切割,將藥物釋放到細(xì)胞質(zhì)。切割型包括酶切割型和非酶切割型。298、非酶切割型包括酸不穩(wěn)定接頭(acid-labile?linker)和氧化還原反應(yīng)接頭(oxidation-reduction?reaction?linker)。299、根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)具體例的抗體-藥物綴合物(adc)使用了(i)酸敏感性接頭或(ii)酶敏感性接頭(圖21至圖23)。300、癌細(xì)胞中蛋白水解酶的活性很高,因此優(yōu)選使用酶敏感性接頭。301、酶切割型通過酶切割,例如組織蛋白酶b(cathepsin?b)、β-葡萄糖醛酸酶(β-glucuronidase)、磷酸酶(phosphatase)、焦磷酸酶(pyrophosphatase)、硫酸酯酶(sulfatase)。302、肽類(peptide)接頭由蛋白水解酶分解,血漿中存在蛋白水解酶抑制物,因此血漿穩(wěn)定性高。用于adc的蛋白水解酶以cathepsin?b為代表。cathepsin?b以高水平存在于腫瘤組織中,為adc賦予腫瘤選擇性。303、peptide接頭由雙肽(dipeptide)或四肽(tetrapeptide)組成,當(dāng)adc內(nèi)化時(shí),其通過溶酶體中蛋白水解酶識(shí)別并切割。tetrapeptide在開發(fā)初期使用,并且已經(jīng)顯示出藥物釋放相對(duì)緩慢以及能夠與疏水性藥物結(jié)合后發(fā)生聚集的局限性。這些問題通過開發(fā)val-cit、phe-lys、val-lys以及val-ala等二肽接頭(dipeptidelinker)得到解決。304、β-glucuronide接頭由存在于溶酶體中的糖解酶β-glucuronidase分解。β-glucuronidase在部分腫瘤細(xì)胞過表達(dá)以賦予腫瘤特異性。305、已知,β-glucuronidase大量存在于溶酶體內(nèi)部,并在部分腫瘤過表達(dá)。該酶在低ph下活性高,但在中性ph下下降至10%,由于這些特性,具有β-glucuronide接頭的adc在血漿中的穩(wěn)定性增強(qiáng),從而防止藥物從靶標(biāo)外釋放。為了確認(rèn)β-glucuronide接頭的血漿穩(wěn)定性,與val-cit接頭一起在大鼠血漿中進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí),7天后,β-glucuronide接頭分別低于89%和50%,非常穩(wěn)定,測得半衰期約為81天和6天。此外,即使具有β-glucuronide接頭的adc以高劑量(最多8個(gè))結(jié)合細(xì)胞毒性藥物,也顯示出高穩(wěn)定性和功效。306、根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)具體例的酶敏感性接頭可以是-s-maleimide-spacer-enzymatic?cleavable?site-self?immolative?spacer-(payload)或-s-dibromaleimide-spacer-enzymatic?cleavable?site-self?immolative?spacer-(payload)。圖23分析了使用酶敏感性接頭的本發(fā)明的adc(dar?8或dar?4)的in?vivo?efficacy。307、其中,self?immolative?spacer的非限制性示例如圖27所示。308、由接頭去綴合(deconjugation)引起的體內(nèi)轉(zhuǎn)化可能是由化學(xué)分離或酶促裂解而出現(xiàn)。309、在賴氨酸殘基上通過酰胺鍵連接接頭的adc的情況下,由于酶的酰胺水解,可能會(huì)以接頭-細(xì)胞毒性藥物形式脫落,在半胱氨酸殘基上連接包含馬來酰亞胺(maleimide)的接頭或包含二硫基(disulfide)的接頭的adc的情況下,半胱氨酸殘基的s會(huì)還原,通過交換(exchanage)方式綴合的接頭-細(xì)胞毒性藥物可能會(huì)脫落。在脫落的狀態(tài)下,單克隆抗體的半胱氨酸殘基可與包含其他半胱氨酸氨基酸或谷胱甘肽(glutathione,gsh)等s在內(nèi)的內(nèi)源性或外源性物質(zhì)以二硫鍵狀態(tài)存在。因此,adc在失去因細(xì)胞毒性藥物引起的靶向上的活性機(jī)制的同時(shí),脫落的接頭-細(xì)胞毒性藥物在另一蛋白質(zhì)或酶等中形成加合物或代謝而表現(xiàn)出活性,因此可能引起毒性。310、氧化還原反應(yīng)接頭以二硫化物(disulfide)接頭為代表。二硫化物(disulfide)接頭也是化學(xué)不穩(wěn)定的接頭的一種,基于氧化還原反應(yīng)。內(nèi)化后,接頭由二硫交換或還原劑(谷胱甘肽(glutathione))分解,并釋放出細(xì)胞毒性藥物。311、已知,谷胱甘肽(glutathione)是低分子量硫醇,可調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖和凋亡,并且是保護(hù)細(xì)胞免受炎癥和氧化應(yīng)激等的抗氧化劑。谷胱甘肽在細(xì)胞內(nèi)以0.5~10mm的濃度存在,但在低氧化狀態(tài)的腫瘤中最高以1000倍濃度存在。在血漿中以低濃度(2~20μm)存在,disulfide接頭是具有高血漿穩(wěn)定性,從而減少非特異性藥物釋放,相對(duì)安全地腫瘤特異性反應(yīng)的接頭。312、在本發(fā)明中,酸敏感性(acid-sensitive)接頭是指如下接頭,即,在血液的中性環(huán)境ph7.3~7.5下穩(wěn)定,但腫瘤細(xì)胞周圍(ph6.5~7.2)或細(xì)胞內(nèi)引起內(nèi)化,在內(nèi)體(ph5.0~6.5)和溶酶體(ph4.5~5.0)等弱酸性環(huán)境下水解以釋放藥物。因此,在本發(fā)明中,酸敏感性接頭具有親水性分子結(jié)構(gòu),以營造水解環(huán)境。為此,酸敏感性接頭可包括例如聚乙二醇(peg)墊片。313、但是,酸性狀態(tài)不僅限于腫瘤微環(huán)境,而且經(jīng)常在細(xì)胞外部被發(fā)現(xiàn),因此可能發(fā)生非特異性藥物釋放。具代表性的接頭具有腙(hydrazone)接頭,最近研究甲硅烷基醚(silylether)接頭,在血漿中具有高穩(wěn)定性,血漿半衰期為7天以上,比2~3天的腙(hydrazone)大有改善。314、優(yōu)選地,喜樹堿類藥物(a)和酸敏感性接頭(c)通過碳酸酯鍵或酯鍵連接,以便在酸性氣氛(ph≤7)下分解,并在酸敏感性接頭分解時(shí)釋放出游離型喜樹堿類藥物。315、tetrapeptide接頭與疏水性藥物結(jié)合,顯示出發(fā)生adc聚集的局限性。316、作為現(xiàn)有的fda批準(zhǔn)的adc,用于戈沙妥珠單抗(trodelvy)的接頭cl2a是滿足以下所有特性的接頭:(i)制備后儲(chǔ)存穩(wěn)定性;(ii)給藥時(shí)血液中的穩(wěn)定性(plasma中幾乎沒有free?payload暴露);(iii)癌組織中快速釋放payload等。317、最初插入cl2衍生物的phe-lys肽可通過組織蛋白酶b切割。作為簡化合成過程的一部分,從cl2a中除去苯丙氨酸,從而除去組織蛋白酶b切割位點(diǎn)。這種變化不影響綴合物結(jié)合、穩(wěn)定性或功效。這表明,它不是cl2中的組織蛋白酶b切割位點(diǎn),而是主要通過對(duì)sn-38的內(nèi)酯環(huán)的ph敏感碳酸芐酯鍵(ph-sensitive?benzyl?carbonate?bond)的切割從綴合物釋放。318、本發(fā)明中使用的酸敏感性接頭可使用cl2a接頭,并且可以如下式7所示設(shè)計(jì),以選擇性且有效地遞送喜樹堿類藥物。即,在本發(fā)明中,酸敏感性接頭可以是來源于下式7的化合物:319、320、其中,x1及x2各自獨(dú)立地為-h或-鹵素;321、y為-nh-、-nra-、或什么都不是即null;322、z為-c1-c4烷基-、-c3-c6環(huán)烷基-、-(c1-c2烷基)-(c3-c6環(huán)烷基)-、-(c3-c6環(huán)烷基)-(c1-c2烷基)-、或-(c1-c2烷基)-(c3-c6環(huán)烷基)-(c1-c2烷基)-;323、w為-rb-、-m--rb-m-、-m-rb-或-rb-m-rc-;324、ra至rc各自獨(dú)立地為c1-c4烷基,325、m為以及326、n為5至9的整數(shù)。327、優(yōu)選地,在所述式7中,328、x1及x2各自獨(dú)立地為-h或-鹵素;329、y為-nra-,或什么都不是即null;330、z為-c1-c4烷基-、-(c1-c2烷基)-(c3-c6環(huán)烷基)-、或-(c3-c6環(huán)烷基)-(c1-c2烷基)-;331、w為-rb-或-rb-m-rc-;332、ra至rc各自獨(dú)立地為c1-c4烷基;333、m為以及334、n可為5至9的整數(shù)。335、在本發(fā)明中,接頭的長度,例如所述式7中,n可以為5至9的整數(shù),具體而言,n可以為6至8的整數(shù),更具體而言,n可以為7,但不限于此。即使超出上述范圍,在根據(jù)接頭長度變化沒有其他效果差異時(shí),當(dāng)然都包含在本發(fā)明的等同范圍內(nèi)。336、可通過在藥物與抗體之間設(shè)置聚乙二醇(peg)墊片來提高藥物的水分散度,式7的接頭包括低分子量peg部分,該部分包括有限數(shù)量(n=5至9)的peg單體。337、式7的酸敏感性接頭是定制型接頭,可根據(jù)目標(biāo)(targeting)對(duì)象、負(fù)載(payload)、載體(carrier)的特性進(jìn)行優(yōu)化。338、喜樹堿類藥物具有容易與各種接頭附著的位點(diǎn)(site),以制備抗體-藥物綴合物。例如,喜樹堿類藥物的醇基位點(diǎn)可用作與接頭的附著位點(diǎn)(site)。339、因此,在本發(fā)明中,[喜樹堿類藥物]-[酸敏感性接頭]可以是喜樹堿類藥物的醇基位點(diǎn)和式7的酸敏感性接頭的醇基位點(diǎn)連接而成的。340、為了開發(fā)可以選擇性地用于多種實(shí)體癌的新型adc,需要應(yīng)用超過現(xiàn)有的adc的藥物遞送效率的接頭系統(tǒng)。為了超越已確立的藥物靶標(biāo)trop-2、her2、folate?receptor等來開發(fā)新型抗原對(duì)象的adc,需要對(duì)ceacam-5等緩慢內(nèi)化(slow?internalizing)抗原和/或ny-eso-1/hla?complex等癌癥特異抗原進(jìn)行adc的開發(fā),但僅憑現(xiàn)有的val-cit或mac-glucuronide?linker系統(tǒng)的有限的藥物遞送效率,很難遞送足夠量的藥物。341、特別是,為了有效遞送ceacam-5等抗原的藥物,在血液和/或正常組織的周圍環(huán)境中,抗體-藥物結(jié)合保持穩(wěn)定性,但在腫瘤微環(huán)境等癌細(xì)胞周圍環(huán)境中,需要快速釋放藥物的特性。342、在癌癥周圍的腫瘤微環(huán)境中也能快速釋放藥物的情況下,對(duì)adc?uptake速度有限制的各種抗原(具代表性的是ceacam-5、各種cancer?specific?antigen-hla?complex等)的靶向也可以有利地使用。343、因此,與ddx5結(jié)合并分解其的喜樹堿類藥物通常與sn-38相比,是為了防止在血液、間質(zhì)液等體液中聚集而提高的水分散性的藥物,因此,為了充分利用其是滲透到癌組織深部、穿透細(xì)胞膜并移動(dòng)到細(xì)胞內(nèi)的疏水性小分子這一點(diǎn),本發(fā)明的特征在于,在到達(dá)癌組織后,作為快速高效地遞送藥物的釋放屬性(release?profile)的接頭,選擇了在癌癥周圍酸性氣氛(ph≤7)下分解的酸敏感性接頭。344、另外,接頭應(yīng)對(duì)血流穩(wěn)定(stable),并防止藥物從抗體分離,在到達(dá)目標(biāo)之前保持前藥(prodrug)狀態(tài),最大限度地減少對(duì)正常組織的傷害,盡管如此,本發(fā)明使用具有親水性分子結(jié)構(gòu)的酸敏感性接頭來以營造水解環(huán)境,并與疏水性藥物結(jié)合,來解決引起adc聚集的問題。345、根據(jù)不同的接頭類型形成不同的代謝物(catabolite)。相關(guān)與此,優(yōu)選地,本發(fā)明的[喜樹堿類藥物]-[酸敏感性接頭]中,喜樹堿類藥物和酸敏感性接頭通過碳酸酯鍵或酯鍵連接,以在酸敏感性接頭分解時(shí)釋放出游離型喜樹堿類藥物。346、通常在水解方面,氨基甲酸酯鍵(carbamate?bonds)相對(duì)于酯鍵和碳酸鹽鍵提供了優(yōu)異的藥物接頭穩(wěn)定性。但是,本發(fā)明的特征在于,為了設(shè)計(jì)出癌細(xì)胞周圍酸性氣氛(ph)下喜樹堿類藥物在癌細(xì)胞周圍細(xì)胞外和細(xì)胞內(nèi)均能夠從藥物接頭分離,使用不穩(wěn)定的酯鍵或碳酸鹽鍵(carbonate?bonds)來代替氨基甲酸酯鍵(carbamate?bonds)。347、血液的ph值維持在7.3~7.4。因此,在血液中,喜樹堿類藥物不會(huì)從酸敏感性接頭被切割出來,即使被切割,也會(huì)在血清的中性ph下,從喜樹堿類藥物的adc的釋放速度也會(huì)比酸性氣氛下的腫瘤組織中的釋放速度要低很多。348、[式1-1的fl118藥物]-[酸敏感性接頭]可以是來源于選自由以下式7-1至7-3表示的化合物組成的組中的任何一種。349、350、351、(其中,n各自獨(dú)立地為5至9的整數(shù))352、為了使adc高效運(yùn)轉(zhuǎn),單純?cè)隗w外(in?vitro)以細(xì)胞為對(duì)象,最大限度地提高強(qiáng)抗原選擇性細(xì)胞毒性是不夠的,在體內(nèi)(in?vivo)乃至實(shí)際患者中,必須能夠很好地滲透到癌組織中以有效地遞送藥物。353、在本發(fā)明的免疫綴合物中,通過靶向癌細(xì)胞的抗原的抗原結(jié)合位點(diǎn)來靶向癌細(xì)胞后,酸敏感性接頭在癌癥周圍酸性氣氛(ph≤7)下被降解,至少一部分喜樹堿類藥物游離,游離型喜樹堿類藥物是疏水性小分子或與sn-38相比為了防止在血液、間質(zhì)液等體液中聚集而提高的水分散性的藥物,因此可滲透至癌組織深部,并穿透細(xì)胞膜移動(dòng)至細(xì)胞內(nèi)。354、因此,在本發(fā)明的免疫綴合物中,通過使用癌癥周圍酸性氣氛(ph≤7)下分解的酸敏感性接頭,可在癌癥周圍的腫瘤微環(huán)境下快速釋放藥物,游離型喜樹堿類藥物是低分子量,不同于抗體,癌組織滲透能力強(qiáng),因此可以解決現(xiàn)有的adc不易滲透到癌組織的深部的抗體問題。355、因此,游離型喜樹堿類藥物向細(xì)胞內(nèi)移動(dòng)的細(xì)胞可以是靶向癌細(xì)胞和/或其周圍細(xì)胞。356、在本發(fā)明中,[接頭]-[抗體或其含抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段]的連接可以是所述抗體或其抗原結(jié)合片段中所含的硫醇基團(tuán),通過反應(yīng)式1的“click”反應(yīng),來與接頭的馬來酰亞胺(maleimide)或馬來酰肼基(maleic?hydrazide)結(jié)合而成的。357、358、接頭的合成相當(dāng)復(fù)雜,使用何種接頭會(huì)影響細(xì)胞毒性藥物的有效釋放。另外,即使是附著在相同抗體氨基酸序列上的接頭,根據(jù)接頭的種類和長度,以及接頭所綴合的抗體位置,在立體環(huán)境和電磁環(huán)境方面,也會(huì)因接頭去綴合而影響體內(nèi)轉(zhuǎn)換。359、接頭的開發(fā)體現(xiàn)了長半衰期,這是單克隆抗體(mab)的一個(gè)優(yōu)勢(shì),因此mab在體循環(huán)過程中必須穩(wěn)定,重要的是接頭與細(xì)胞毒性藥物的結(jié)合不影響抗體的穩(wěn)定性和藥代動(dòng)力學(xué)。360、一般來說,與接頭-細(xì)胞毒性藥物相關(guān)的全身血液循環(huán)過程中可能發(fā)生的分解代謝反應(yīng)如下,還有各種其他尚未確定的分解代謝反應(yīng):腙裂解(hydrazone?cleavage)、蛋白酶介導(dǎo)的二肽裂解(protease-mediated?dipeptide?cleavage)、酯酶介導(dǎo)的氨基甲酸酯裂解(esterase-mediated?carbamate?cleavage)、醋酸酯水解(hydrolysis?of?acetateester)、二硫鍵裂解(disulfide?cleavage)、琥珀酰亞胺開環(huán)(succinimde?ringopening)。361、在一些情況下,接頭-細(xì)胞毒性藥物的特定位置發(fā)生的分解代謝作用可以維持細(xì)胞毒性作用并在靶標(biāo)處活躍,并且可能在全身血液循環(huán)中引起毒性。相反,如果失去細(xì)胞毒作用,即使藥物達(dá)到了靶點(diǎn),也可能難以預(yù)期藥理作用。362、目前臨床試驗(yàn)中的相當(dāng)一部分adc采用化學(xué)接頭,如腙(hydrazone)、二硫化物(disulfide)、肽(peptide)或硫醚(thioether)鍵等。從接頭釋放藥物的過程利用癌細(xì)胞內(nèi)特定的ph或酶濃度等的差異。通常,hydrazone和disulfide接頭在血漿中的穩(wěn)定性有限。反之,基于肽的接頭在血漿中的穩(wěn)定性優(yōu)異,并且易于控制藥物的釋放。363、基于肽的纈氨酸-瓜氨酸(valine-citrulline)接頭通過組織蛋白酶(cathepsin)切割。纈氨酸-丙氨酸(valine-alanine,val-ala)和纈氨酸-瓜氨酸(valine-citrulline,val-cit)等可切割的二肽(dipeptide)接頭在溶酶體提取物或純化的人cathepsin?b存在下進(jìn)行快速水解,因此接頭的切割原理依賴于細(xì)胞內(nèi)部的環(huán)境。364、一些化學(xué)接頭通過調(diào)節(jié)抗體和藥物的疏水性(hydrophobicity)的平衡,防止adc在親水性環(huán)境的血流中的聚集。親水性接頭和墊片(spacer)中有環(huán)糊精(cyclodextrin)、聚乙二醇(polyethylene?glycol,peg)或其他聚合物,在血流中的穩(wěn)定性和藥物動(dòng)力學(xué)特性中起作用。365、在有機(jī)溶劑和水溶液中均表現(xiàn)出高溶解度的含有磺酸鹽-(sulfonate-)或peg-的親水性墊片接頭在疏水性接頭中觀察到的各種問題。peg接頭具有水溶性、低毒性、低免疫原性以及調(diào)節(jié)的接頭鏈長度等優(yōu)點(diǎn)。相關(guān)于此,距研究報(bào)告,若使用peg接頭,則體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)屬性大大增強(qiáng),半衰期和血漿濃度增加,從而導(dǎo)致血漿濃度-時(shí)間曲線(auc)增加。366、本發(fā)明使用的接頭只要是在相關(guān)領(lǐng)域已知的,都可以使用。代表性示例有cl-2a、mc-vc-pabc、mc-ggfg、mc-aaa、mc-va-pabc、mac-glucuronide接頭等。367、[抗體及其改性]368、治療性抗體已越來越多地用于治療各種疾病,如癌癥、自身免疫和炎癥性疾病、感染性疾病等,在一些情況下,正在掀起一場嚴(yán)重疾病治療革命。在癌癥、自身免疫及炎癥性疾病、感染性疾病三種臨床情況下,正在使用多種治療用抗體。用于治療癌癥的治療性抗體靶向腫瘤細(xì)胞中表達(dá)的特定分子。許多研究表明,這種抗體通過兩種機(jī)制殺死腫瘤細(xì)胞。與腫瘤細(xì)胞結(jié)合的igg1抗體被巨噬細(xì)胞的fcγ受體識(shí)別,從而激活吞噬作用(癌癥文獻(xiàn)中稱之為抗體依賴性細(xì)胞吞噬作用,adcp)。此外,nk細(xì)胞的fcγriii與腫瘤細(xì)胞結(jié)合抗體結(jié)合,通過抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(adcc)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞凋亡。作為另一種具有特定靶標(biāo)的治療性抗體,曲妥珠單抗(商品名稱:赫賽汀)在一些進(jìn)展性乳腺癌中發(fā)現(xiàn)的表皮生長因子受體(又稱egfr、her-2)反應(yīng)。egf是腫瘤生長所必需的,當(dāng)阻斷受體時(shí),細(xì)胞中缺乏該必需激活因子。赫賽汀還誘導(dǎo)adcp和adcc以提供保護(hù)功能。369、腫瘤細(xì)胞的兩種共同抑制受體(ctla-4和pd-1)或與共同抑制配體pd-l1反應(yīng)的癌癥治療抗體協(xié)同患者免疫系統(tǒng)清除腫瘤。ctla-4、pd-1以及pd-l1等抑制蛋白質(zhì)的抗體阻斷,現(xiàn)有腫瘤特異性t細(xì)胞能夠破壞非常難治療的癌癥。370、與小分子治療藥物相比,單克隆抗體治療藥物具有很多優(yōu)點(diǎn)。靶標(biāo)特異性高,因此作用于靶標(biāo)以外的位點(diǎn)產(chǎn)生的副作用小,分子量大,無法通過血液屏障,因此中樞神經(jīng)系統(tǒng)副作用也小。此外,由于分解為氨基酸,并有網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)代謝,因此不經(jīng)過肝代謝和腎排泄,與其他藥物幾乎沒有藥物相互作用,對(duì)肝病或腎病患者來說可以相對(duì)安全地使用。其優(yōu)點(diǎn)是半衰期較長,從數(shù)周到數(shù)月給藥一次即可。反之,由于是蛋白質(zhì),分子量大,容易被蛋白質(zhì)分解酶在胃腸道中破壞,因此不能作為口服劑使用。另外,當(dāng)由于較長的半衰期而發(fā)生意想不到的副作用時(shí),也有不能以非侵入性方式快速去除的缺點(diǎn)。與低分子藥劑不同,可能會(huì)產(chǎn)生針對(duì)抗體的中和抗體(neutralizing?antibody)和對(duì)注射部位的過敏癥。由于單克隆抗體在妊娠后期通過胎盤,因此有可能影響胎兒和胎盤的生長。371、為了降低體內(nèi)免疫原性,正在產(chǎn)生嵌合體、人源化或完全人源化的單克隆抗體,其序列部分或完全來源于人。372、治療性抗體變形以優(yōu)化體內(nèi)功能,包括激活補(bǔ)體、與激活吞噬作用的fc受體的結(jié)合、adcc、抑制信號(hào)、延長血液中的壽命等。373、另一方面,human?epidermalgrowth?factor?receptor(her/egfr/erbb)中有egfr、her2、folr、psma或trop-2等。374、egfr是受體酪氨酸激酶(tyrosine?kinase)中最早發(fā)現(xiàn)的生長因子受體,已知在70%以上的非小細(xì)胞肺癌過表達(dá),這種egfr過表達(dá)與不良預(yù)后有關(guān)。但若egfr與配體(ligand)結(jié)合,隨后進(jìn)行受體二聚化(receptor?dimerization),細(xì)胞內(nèi)酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域(tyrosine?kinase?domain)的活化環(huán)(activation?loop)被自身磷酸化(autophosphrylation),通過絲裂原激活蛋白激酶(mitogenactivated?protein?kinase,mapk)和akt等通路,激活細(xì)胞增殖、細(xì)胞存活、血管生成以及轉(zhuǎn)移等癌癥基因的關(guān)鍵信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)。阻斷egfr的方法有兩種,一種是在細(xì)胞外使用干擾ligand的efgr結(jié)合的egfr單克隆抗體的方法,另一種是在細(xì)胞內(nèi)egfr?tyrosine?kinase?domain的磷酸化過程中與atp競爭性地干擾小分子egfr-tki。375、已知,若使用egfr-tki,則發(fā)生凋亡,從而產(chǎn)生快速效果。376、erlotinib、gefitinib被開發(fā)成tyrosine?kinase抑制劑,用作非小細(xì)胞肺癌的治療藥物,egfr突變體被稱為生物標(biāo)志物。377、已知,egfr突變選擇性地激活egfr下部信號(hào)傳導(dǎo)通路中促進(jìn)細(xì)胞和抗凋亡的akt和stat通路,而對(duì)與細(xì)胞增殖相關(guān)的erk通路沒有影響。378、此外,gefitinib和erlotinib也被用作egfr突變型晚期非小細(xì)胞肺癌的藥物。以egfr為目標(biāo)的抗體藥品,panitumumab和cetuxcimab被開發(fā)出來,用于egfr?wild-type轉(zhuǎn)移性結(jié)腸癌的治療。特別是,cetuximab是針對(duì)egfr的extracellular?domain的抗egfr抗體,已被批準(zhǔn)用于治療晚期結(jié)腸癌和鱗狀上皮細(xì)胞癌,panitumumab被批準(zhǔn)用于治療轉(zhuǎn)移性結(jié)腸癌。據(jù)悉,抗egfr治療藥物中kras突變是生物標(biāo)志物,根據(jù)最近的報(bào)告,在p16-negative鱗狀上皮細(xì)胞癌中顯示出更高的存活率。379、體外(in?vitro)對(duì)egfr的單克隆抗體cetuximab在對(duì)egfr-tki具有耐藥性的細(xì)胞系中顯示出活性開發(fā)了。abx-egf,并開發(fā)了針對(duì)her-2/neu(erbb2)的trastuzumab。380、cetuximab(c225,erbitux)是一種與egfr的細(xì)胞外水溶性位點(diǎn)結(jié)構(gòu)域iii(domainiii)結(jié)合的murine/human?chimeric單克隆抗體,阻斷egfr的dimerization。據(jù)悉,與單一療法相比,cetuximab在與現(xiàn)有細(xì)胞毒性抗癌療法的聯(lián)合治療中更有效果。聯(lián)合cisplatin的i期研究證實(shí),以cetuximab?200~400mg/m2的劑量,無累積毒性,復(fù)發(fā)性非小細(xì)胞肺癌患者中immunohistochemistry對(duì)egfr表達(dá)為+1以上的患者為對(duì)象的ii期研究中,聯(lián)合docetaxel治療的結(jié)果,反應(yīng)率25%,疾病控制率60%以上,顯示出令人鼓舞的結(jié)果。在此基礎(chǔ)上,目前進(jìn)行了與docetaxel或pemetrexed聯(lián)合治療iii期研究。cetuximab目前處于在結(jié)腸癌上獲得批準(zhǔn)的狀態(tài),據(jù)報(bào)道,在局部晚期頭頸癌中與放射治療聯(lián)合治療具有協(xié)同作用。381、與cetuximab不同,abx-egf是一種完全人源化igg2單克隆抗體,已知,對(duì)egfr的親和力高于cetuximab。盡管據(jù)報(bào)道,皮膚毒性是i期研究中最常見的毒性,但這并不是一個(gè)嚴(yán)重的問題,進(jìn)行了與paclitaxel/carboplatin聯(lián)合治療的iii期研究。382、分子靶向抗癌藥物聚焦在個(gè)別癌癥特異性細(xì)胞或基因,因此預(yù)計(jì)可以有效治療。383、據(jù)悉,被稱為受體性tyrosine?kinase的her2(human?epidermal?growth?factorreceptor-2)在乳腺癌中過度表達(dá),因此被提議為以her2為目標(biāo)的藥物有功效的生物標(biāo)志物。事實(shí)上,針對(duì)her2開發(fā)的trastuzumab、pertuzumab、trastuzubmab?emtansine三種藥物已被批準(zhǔn)用于治療her-2-positive乳腺癌。384、trastuzumab(herceptin)是對(duì)her2/neu(erbb2)的chimeric單克隆抗體,是轉(zhuǎn)移性乳腺癌中fda公認(rèn)的藥物。因?yàn)榈侥壳盀橹?,在非小?xì)胞肺癌中還沒有得到值得關(guān)注的成績報(bào)告,但在非小細(xì)胞肺癌患者中,her2表達(dá)觀察到的頻率并不高。385、據(jù)悉,在乳腺癌中,her2過表達(dá)對(duì)細(xì)胞的生存、增殖、血管生成、侵襲及轉(zhuǎn)移具有促進(jìn)作用。此外,乳腺癌對(duì)傳統(tǒng)全身抗癌化學(xué)療法表現(xiàn)出耐藥性,預(yù)測出不良的預(yù)后,因此成為腫瘤治療的靶標(biāo)。因此,在確定轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者的抗癌化療前,必須先對(duì)her2受體受體進(jìn)行檢測,her2過表達(dá)為immunohistochemical(ihc)stain(3+)或her2?ihc(2+)時(shí),利用熒光原位雜交(fluorescencein-situ?hybridization,fish)或硅原位雜交(silver?in-situhybridization,sish)來評(píng)估是否過表達(dá)。386、trastuzumab于1998年開發(fā)出一種人源單克隆抗體(humanized?monoclonalantibody),靶向her2蛋白的extracelluar?domain位點(diǎn),并首次獲得fda批準(zhǔn)。387、trastuzumab作用于her2蛋白質(zhì)的機(jī)制首先是減少過表達(dá)的her2的量以抑制癌細(xì)胞生長,因此只有少數(shù)的癌細(xì)胞中發(fā)生細(xì)胞凋亡,但與細(xì)胞毒性抗癌藥物聯(lián)合給藥時(shí),細(xì)胞凋亡將大幅增加。第二是幫助nk細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等癌癥殺傷細(xì)胞殺死her2陽性乳腺癌。388、腫瘤的生長與新生血管的形成有關(guān),因此腫瘤細(xì)胞促進(jìn)血管生成。在此過程中,需要的物質(zhì)是血管內(nèi)皮生長因子(vascular?endothelial?growth?factor,vegf),vegf受體比起正常血管,更傾向于在腫瘤血管過表達(dá)。bevacizumab是重組人源化鼠單克隆抗體(recombinant?humanized?murine?monoclonal?antibody),與vegf結(jié)合,使其不能與受體結(jié)合,從而抑制新生血管的形成,以顯示出抗癌效果。389、根據(jù)本發(fā)明,為了提供使用解離常數(shù)kd值(value)為1*10-8m以上且小于1*10-6m的抗體的egfr?adc,可使用kd值(kd?value)為1*10-8m以上且小于1*10-6m,例如為2.9*10-8m的nimotuzumab,以代替kd值(kd?value)為1.8*10-9m的cetuximab。390、根據(jù)本發(fā)明,為了提供使用解離常數(shù)kd值(value)為1*10-8m以上且小于1*10-6m的抗體的trop-2?adc,可從kd值(kd?value)為1.7*10-9m的sacituzumab逐一改變fv?sequence的氨基酸,以制備kd值(kd?value)為1*10-8m以上且小于1*10-6m,例如為4*10-8m的抗體(sacituzumab-1)。391、根據(jù)本發(fā)明,為了提供使用解離常數(shù)kd值(value)為1*10-8m以上且小于1*10-6m的抗體的her2?adc,可從kd值(kd?value)為2.7*10-9m的trastuzumab逐一改變fv?sequence的氨基酸,以制備kd值(kd?value)為1*10-8m以上且小于1*10-6m,例如為3*10-8m的抗體(trastuzumab-1)。392、抗體是適應(yīng)性免疫反應(yīng)的必要組成部分。免疫球蛋白g(igg)是在循環(huán)系統(tǒng)和細(xì)胞外液中發(fā)現(xiàn)的最常見的抗體類型。盡管只用igg也能夠通過抗原結(jié)合區(qū)域的活動(dòng)直接保護(hù)身體免受感染,但大部分的igg免疫功能是通過蛋白質(zhì)和受體介導(dǎo)的,這些受體通過與igg的片段結(jié)晶(fc)區(qū)域結(jié)合的特殊細(xì)胞亞群表達(dá)的。fc伽馬(γ)受體(fcγr)目前屬于廣泛的蛋白質(zhì)家族,不僅包括經(jīng)典的膜結(jié)合表面受體,還包括非典型細(xì)胞內(nèi)受體和細(xì)胞質(zhì)糖蛋白。在非典型fcγr中,新生兒fc受體(fcrn)因其對(duì)igg生物學(xué)的密切影響及其結(jié)合白蛋白的能力而越來越臭名昭著。fcrn作為再利用或轉(zhuǎn)細(xì)胞增多癥受體發(fā)揮作用,負(fù)責(zé)維持循環(huán)系統(tǒng)中的igg和白蛋白,并通過極化的細(xì)胞屏障雙向運(yùn)輸這兩種配體。最近,評(píng)估了fcrn作為免疫受體通過與源自igg免疫復(fù)合物(ic)的肽相互作用并促進(jìn)抗原呈遞。393、抗體與血流靶標(biāo)結(jié)合后被細(xì)胞吸收。一旦進(jìn)入內(nèi)體隔室,抗體就會(huì)被fcrn保護(hù)免受分解并再利用。通過這種方式,治療性抗體的長半衰期被保存下來,在化學(xué)計(jì)量水平以下也更有效。394、為了提高抗體的所需功能特性,正在進(jìn)行通過突變改變鉸鏈和fc序列。395、例如,fc區(qū)域被設(shè)計(jì)為產(chǎn)生對(duì)c1q補(bǔ)體成分具有更高50倍結(jié)合親和力的抗體,從而使單個(gè)igg抗體能夠激活補(bǔ)體介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞凋亡。396、在血管內(nèi)皮細(xì)胞中,fcrn識(shí)別的fc區(qū)域其他氨基酸取代可增加igg在循環(huán)系統(tǒng)中的半衰期。對(duì)于許多治療抗體,延長體內(nèi)壽命可使患者在抗體效果、減少注射次數(shù)、降低治療成本等方面受益匪淺。397、治療性免疫球蛋白g(igg)抗體具有相對(duì)較長的半衰期,因?yàn)樾律鷥篺c受體(fcrn)在內(nèi)體酸性ph值下與igg?fc結(jié)合,并保護(hù)igg不被分解。為了進(jìn)一步延長半衰期,正在開發(fā)對(duì)fcrn具有高親和力的氨基酸取代抗體,其中一種治療性抗體(雷夫利珠單抗)已被批準(zhǔn)。398、隨著單克隆抗體(mab)作為治療多種人類疾病(包括慢性炎癥、感染、癌癥、自身免疫性疾病、心血管疾病和移植醫(yī)學(xué))的廣泛使用,fcrn已成為mab功效的主要調(diào)節(jié)因子。這與治療性抗體在血液中的持續(xù)性直接相關(guān),最終可能會(huì)增加靶標(biāo)位點(diǎn)區(qū)域化。為了確保igg的長循環(huán)半衰期,ph依賴性結(jié)合和fcrn依賴性再利用至關(guān)重要。重要的是,中性ph值下的限制性結(jié)合是對(duì)igg從細(xì)胞適當(dāng)釋放所必需的,并且在酸性ph值下,mab對(duì)fcrn親和力的增加與半衰期延長相關(guān)。因此,開發(fā)了一種igg?fc操作來優(yōu)化與fcrn的ph依賴性結(jié)合,以調(diào)整藥代動(dòng)力學(xué)并增加mab半衰期。例如,mst突變(met252tyr/ser254thr/thr256glu)使人和猴子中igg的持續(xù)性增加至最大5倍。在ii期臨床試驗(yàn)中,igg?mst菌株顯示出80~120天的半衰期。類似地,與igg?fc的重要fcrn結(jié)合位點(diǎn)相鄰的mn(met428leu/asn434ser)突變顯示出延長igg對(duì)治療抗體的半衰期的可能性。399、例如,通過篩選在人igg分子的恒定區(qū)(constant?domain)的特定區(qū)域引入隨機(jī)氨基酸突變的文庫,收集和表征增加igg分子對(duì)fcrn的親和力的突變,以能夠制備血清半衰期延長的抗體。400、為了提供用于本發(fā)明的免疫綴合物的kd值(value)為1*10-8m以上且小于1*10-6m,或當(dāng)以2價(jià)而不是1價(jià)結(jié)合時(shí)結(jié)合親和力更高的抗體或其含抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段(b),可使用如上所述的各種抗體和各種工程化的抗體。401、[藥學(xué)上可接受的鹽]402、在本說明書中,藥學(xué)上可接受的鹽是指制藥工業(yè)中常用的鹽,例如包括:無機(jī)離子的鹽,鈉、鉀、鈣、鎂、鋰、銅、錳、鋅、鐵等;無機(jī)酸的鹽,鹽酸、磷酸和硫酸等;有機(jī)酸的鹽,抗壞血酸、檸檬酸、酒石酸、乳酸、馬來酸、丙二酸、富馬酸、乙醇酸、琥珀酸、丙酸、乙酸、乳清酸、乙酰水楊酸等;氨基酸鹽,賴氨酸、精氨酸、胍等。并且具有藥物反應(yīng)、純化以及分離過程中可能使用的四甲基銨、四乙基銨、四丙基銨、四丁基銨、芐基三甲基銨、芐索銨等有機(jī)離子的鹽。然而,本發(fā)明中所指的鹽的類型不受所列的這些鹽的類型的限制。403、[多種載體-藥物綴合物(carrier-drug?conjugate)]404、向癌組織內(nèi)部容易遞送adc或其他靶向藥物偶聯(lián)物(targeted-drug?conjugate)是非常重要的,根據(jù)本發(fā)明的[喜樹堿類藥物]-[接頭]綴合物可應(yīng)用于除抗體外的各種藥物載體(carrier),與抗體不同,使用具有可以很好地滲透到癌組織的深部、cmc容易的特性的載體,以能夠很好地應(yīng)用于各種用途。405、載體(carrier)可以是抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)、肽、重復(fù)體(repebody)和/或核酸適體。406、表1407、408、409、核酸適體-藥物綴合物(aptamer-drug?conjugate,apdc)是在adc中引入的核酸適體,而不是抗體。核酸適體是具有三維結(jié)構(gòu)的單鏈核酸。它是通過'selex'(systematicevolution?of?ligands?by?exponentialenrichment)過程發(fā)現(xiàn)的。selex是一種獲得與化合物庫中的目標(biāo)蛋白質(zhì)分子結(jié)合的功能性核酸的技術(shù)。410、核酸適體可以非常強(qiáng)烈且選擇性地與靶標(biāo)結(jié)合,因此也稱為化學(xué)抗體(chemicalantibody)。核酸適體的大小約為20kda,與抗體相比,已知具有出色的細(xì)胞穿透性和較低的免疫原性。411、由于核酸適體可以化學(xué)合成,因此在制造核酸適體-藥物綴合物時(shí)可以精確設(shè)計(jì)綴合位置和綴合藥物的數(shù)量。生產(chǎn)成本比adc低。412、核酸適體一般由天然核酸制成,因此會(huì)被體內(nèi)的核酸降解酶降解,使其在體內(nèi)穩(wěn)定性較差。然而,通過利用核酸適體化學(xué)修飾的便利性,可以克服修飾核酸適體穩(wěn)定性的限制。413、肽-藥物綴合物(peptide-drug?conjugate,pdc)是adc的一種形式,其中引入肽而不是抗體。肽由氨基酸組成,大小范圍為500至5000da(道爾頓)。與150kda(千道爾頓)以上的抗體相比,這個(gè)尺寸非常小。因此,基于肽的pdc相比adc具有更優(yōu)異的細(xì)胞穿透能力,并且產(chǎn)生免疫原性的可能性很低。另外,肽可以化學(xué)合成。因此,pdc不僅生產(chǎn)成本非常低,而且可以精確控制肽與藥物的綴合位置和比例。414、一般來說,肽很容易被蛋白水解酶降解,因此生物半衰期短。為了克服基于肽的藥物綴合物的這些局限性,人們提出了使用修飾肽(例如環(huán)肽、引入非天然氨基酸等)的策略。415、重復(fù)體(repebody)是一種人工抗體,不具有抗體骨架,但具有像抗體一樣識(shí)別抗原的功能??梢酝ㄟ^噬菌體展示(phage?display)技術(shù)發(fā)現(xiàn)針對(duì)目標(biāo)蛋白的特異性重復(fù)體。416、噬菌體展示是在噬菌體表面表達(dá)所需蛋白質(zhì)的技術(shù)。重復(fù)體大小約為30kda,是抗體的約20%。因此,已知與抗體相比,具有相對(duì)較低的免疫原性和改善的細(xì)胞穿透性。此外,預(yù)計(jì)可以通過控制重復(fù)體的熱穩(wěn)定性和ph穩(wěn)定性來提高結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性。與抗體相比,生產(chǎn)成本也被評(píng)價(jià)為相對(duì)較低。由于重復(fù)體的這些優(yōu)點(diǎn),人們對(duì)開發(fā)重復(fù)體-藥物綴合物(repebody-dc)作為用重復(fù)體替代抗體的策略的關(guān)注度正在增加。417、因此,本發(fā)明的載體-藥物綴合物(carrier-drug?conjugate)的制備方法的特征在于,使用根據(jù)本發(fā)明的[喜樹堿類藥物]-式2的酸敏感性接頭]綴合物或其藥學(xué)上可接受的鹽,通過式2的接頭將至少一個(gè)喜樹堿類藥物鏈接到載體(carrier)。418、[用于預(yù)防或治療癌癥的藥物組合物]419、本發(fā)明提供用于預(yù)防或治療癌癥的藥物組合物,所述組合物包含如上所述的根據(jù)本發(fā)明的免疫綴合物或其藥學(xué)上可接受的鹽作為有效成分。420、此外,根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)具體例,提供用于治療或預(yù)防癌癥的方法,所述方法包括將所述免疫綴合物的治療有效量施用于需要它的對(duì)象(subject)的步驟。所述對(duì)象(subject)可以是包括人類在內(nèi)的哺乳類。421、本發(fā)明的免疫綴合物與癌細(xì)胞的抗原特異性結(jié)合,并在癌細(xì)胞內(nèi)外釋放藥物以顯示出細(xì)胞毒性,因此可有效用于癌癥的治療或預(yù)防。具有本發(fā)明的免疫綴合物的抗癌活性如上所述。422、在本發(fā)明中,所述癌癥可以是實(shí)體瘤或血液癌。例如,選自由假性粘液瘤、肝內(nèi)膽管癌、肝母細(xì)胞瘤、肝癌、甲狀腺癌、結(jié)腸癌、睪丸癌、骨髓增生異常綜合征、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、口腔癌、唇癌、蕈樣肉芽腫、急性粒細(xì)胞白血病、急性淋巴細(xì)胞白血病、基底細(xì)胞癌、卵巢上皮癌、卵巢生殖細(xì)胞癌、男性乳腺癌、腦癌、腦癌垂體腺瘤、多發(fā)性骨髓瘤、膽囊癌、膽道癌、結(jié)腸癌、慢性粒細(xì)胞白血病、慢性淋巴細(xì)胞白血病、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤、脈絡(luò)膜黑色素瘤、壺腹癌、膀胱癌、腹膜癌、甲狀旁腺癌、腎上腺癌、鼻竇癌、非小細(xì)胞肺癌、舌癌、星形細(xì)胞瘤、小細(xì)胞肺癌、小兒腦癌、小兒淋巴瘤、小兒白血病、小腸癌、腦膜瘤、食道癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、腎盂癌、腎癌、心臟癌、十二指腸癌、惡性軟組織癌、惡性骨癌、惡性淋巴瘤、惡性間皮瘤、惡性黑色素瘤、眼癌、外陰癌、輸尿管癌、尿道癌、原發(fā)部位不明癌、胃淋巴瘤、胃癌、胃類癌、胃腸道間質(zhì)癌、腎母細(xì)胞瘤、乳腺癌、肉瘤、陰莖癌、咽癌、妊娠性滋養(yǎng)細(xì)胞疾病、宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌、子宮肉瘤、前列腺癌、轉(zhuǎn)移性骨癌、轉(zhuǎn)移性腦癌、縱隔癌、直腸癌、直腸類癌、陰道癌、脊髓癌、聽神經(jīng)瘤、胰腺癌、唾液腺癌、卡波西肉瘤、佩吉特病、扁桃體癌、鱗狀細(xì)胞癌、肺腺癌、肺癌、肺鱗狀細(xì)胞癌、皮膚癌、肛門癌、橫紋肌肉瘤、喉癌、胸膜癌、血液癌、以及胸腺癌組成的組中的一種以上,但不限于此。另外,所述癌癥不僅包括原發(fā)性癌癥,還包括轉(zhuǎn)移性癌癥。423、本發(fā)明中使用的術(shù)語“治療有效量”表示對(duì)癌癥的治療或預(yù)防有效的所述免疫綴合物的量。具體而言,“治療有效量”是指足以以能夠適用于醫(yī)學(xué)治療的合理效益/風(fēng)險(xiǎn)比來治療疾病的量,有效劑量水平可根據(jù)對(duì)象類型及嚴(yán)重程度、年齡、性別、疾病類型、藥物的活性、對(duì)藥物的敏感性、給藥時(shí)間、給藥途徑及排泄率、治療持續(xù)時(shí)間、包括同時(shí)使用的藥物的因素以及其他醫(yī)學(xué)領(lǐng)域周知的因素來確定。本發(fā)明的藥物組合物可以作為單獨(dú)治療藥物施用或者與其他治療藥物組合施用,或者可以與市售的治療藥物依次或同時(shí)施用。并且,可以單次或多次給藥。考慮到所有上述因素,重要的是施用能夠以最小量達(dá)到最大效果而沒有副作用的量,示出劑量依賴性的效果,因此給藥劑量可根據(jù)患者的狀態(tài)、年齡、性別、以及并發(fā)癥等各種因素由本發(fā)明所屬
技術(shù)領(lǐng)域
:的普通技術(shù)人員來簡單確定本發(fā)明的藥學(xué)組合物的有效成分具有優(yōu)異的安全性,因此還能夠以所確定的給藥劑量以上來使用。424、此外,根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)具體例,本發(fā)明提供所述免疫綴合物在制備用于治療或預(yù)防癌癥的藥物(medicament)的用途(use)。用于制備藥物的所述免疫綴合物可與可接受的助劑、稀釋劑、載體等混合,并且可與其他活性制劑一同制備成復(fù)合制劑,以具有活性成分的協(xié)同作用。425、本發(fā)明的用途、組合物、治療方法中提及的事項(xiàng)同等適用,除非它們彼此矛盾。426、發(fā)明的效果427、本發(fā)明可提供抗體-藥物綴合物(adc),所述抗體-藥物綴合物(adc)使用表示抗體與藥物靶標(biāo)結(jié)合的程度的kd值(kd?value)為1*10-8m以上且小于1*10-6m的抗體,并使用降解ddx5蛋白的喜樹堿系列的拓?fù)洚悩?gòu)酶i(topoisomerase?i)抑制劑作為有效負(fù)載,從而與現(xiàn)有adc相比,可顯示出強(qiáng)大效力并可確保安全性。428、本發(fā)明中使用的[當(dāng)以二價(jià)而不是一價(jià)結(jié)合細(xì)胞表面蛋白的抗原表位時(shí)結(jié)合親和力更高的抗體或其含抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段]以靶向[正常細(xì)胞和癌細(xì)胞中均表達(dá)的細(xì)胞表面蛋白]的方式設(shè)計(jì)時(shí),由于抗體介于受體引起內(nèi)化的特征,與抗原的抗原表位(epitope)結(jié)合力越強(qiáng),越能夠發(fā)生更多的內(nèi)化,反向利用所述抗原結(jié)合力,不僅可以解決靶點(diǎn)關(guān)聯(lián)毒性(on?target?toxicity)問題,還可通過與[降解ddx5蛋白的喜樹堿類藥物]之間的組合使用,能夠以所謂細(xì)胞程序性死亡(apoptosis)的機(jī)制來增加治療效果。429、根據(jù)本發(fā)明,使用如下的抗體或其含抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段的免疫綴合物可提高靶標(biāo)組織滲透性以使靶向治療效果最大化:抗體或其含抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段(b-1),對(duì)細(xì)胞表面蛋白的抗原表位的解離常數(shù)kd值(value)為1*10-8m以上且小于1*10-6m;或者抗體或其含抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段(b-2),其與在正常細(xì)胞和癌細(xì)胞中均表達(dá)的細(xì)胞表面蛋白結(jié)合,當(dāng)以二價(jià)而不是一價(jià)結(jié)合細(xì)胞表面蛋白的抗原表位時(shí),結(jié)合親和力更高。當(dāng)前第1頁12當(dāng)前第1頁12
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