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一種低背景值的試劑盒的制備方法與流程

文檔序號:41984789發布日期:2025-05-23 16:40閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種低背景值的試劑盒的制備方法,其特征在于,包括抗體包被的磁微粒和標記了堿性磷酸酶的抗體的制備;

2.根據權利要求1所述的低背景值的試劑盒的制備方法,其特征在于,步驟(1)中含堿性磷酸酶的緩沖液為非胺緩沖液;

3.根據權利要求1所述的低背景值的試劑盒的制備方法,其特征在于,步驟(1)和步驟(2)中淬滅條件為:向交聯反應后的反應液中加入ph為7.2、濃度為1m的甘氨酸緩沖液,室溫反應0.5~2h。

4.根據權利要求1所述的低背景值的試劑盒的制備方法,其特征在于,步驟(2)中抗體進行巰基封閉的預處理的方法為:將質量濃度為0.1~1%的1m的巰基封閉劑加入到含抗體的ph7.2~8.0、0.01~0.1m的非胺緩沖液中,室溫反應0.5~1h;

5.根據權利要求1所述的低背景值的試劑盒的制備方法,其特征在于,步驟(2)中磺基琥珀酰亞胺-4-(n-馬來酰亞胺甲基)環己烷-1-羧酸鹽與預處理后的抗體的交聯反應條件為:室溫反應0.5~3h或者2~8℃反應12~18h,磺基琥珀酰亞胺-4-(n-馬來酰亞胺甲基)環己烷-1-羧酸鹽與抗體的摩爾比為10~100:1。

6.根據權利要求1所述的低背景值的試劑盒的制備方法,其特征在于,步驟(3)中孵育反應條件為:室溫反應2~4h或者2~8℃反應18~24h。其中堿性磷酸酶與抗體的摩爾比為1:1~3,優選比例為1:1。

7.根據權利要求1所述的低背景值的試劑盒的制備方法,其特征在于,抗體包被的磁微粒的制備方法包括以下步驟:

8.根據權利要求7所述的低背景值的試劑盒的制備方法,其特征在于,抗體-磁微粒的偶聯方法為:抗體用100mm?mes緩沖液稀釋,并將活化后的羧基磁微粒緩慢加至上述稀釋好的抗體中,渦旋混勻,室溫孵育3h;抗體與磁微粒質量比為1:20~1:200,優選為1:100。

9.根據權利要求1所述的低背景值的試劑盒的制備方法,其特征在于,封閉、洗滌的方法為:

10.根據上述權利要求1-9任一項所述的制備方法制備得到的試劑盒。


技術總結
一種低背景值的試劑盒的制備方法,包括抗體包被的磁微粒和標記了堿性磷酸酶的抗體的制備;所述標記了堿性磷酸酶的抗體的制備方法包括以下步驟:(1)堿性磷酸酶的活化;(2)抗體的活化;(3)活化后的堿性磷酸酶與活化后的抗體的偶聯:將上述步驟(1)獲得的活化的堿性磷酸酶與步驟(2)獲得的活化的抗體混合后孵育反應,反應完成后,經封閉、透析后獲得標記了堿性磷酸酶的抗體。該方法制備的試劑盒提高了磁珠與抗體的偶聯效率,相比現有的偶聯工藝,背景值更低。

技術研發人員:胡靈子,張聞,王天召,王遠
受保護的技術使用者:寧波瑞源生物科技有限公司
技術研發日:
技術公布日:2025/5/22
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