本申請(qǐng)涉及分析檢測(cè)的，尤其是涉及一種厄貝沙坦中雜質(zhì)的測(cè)定分析方法。
背景技術(shù)：
1、厄貝沙坦(irbesartan)化學(xué)名為3-((2'-(1h-四氮唑-5-基)-[1,1'-聯(lián)苯]-4-基)甲基)-2-丁基-1,3-二氮雜螺環(huán)[4,4]壬-1-烯-4-酮，是一種治療原發(fā)性高血壓，合并高血壓的2型糖尿病腎病的藥物。在厄貝沙坦工藝中，新評(píng)估出了一種潛在遺傳毒性雜質(zhì)，化學(xué)名稱為2-丁基-1-亞硝基-1,3-二氮雜螺環(huán)[4.4]壬-2-烯-4-酮，其化學(xué)結(jié)構(gòu)如下所示，并在下文中稱為fy-s03。
2、
3、上述雜質(zhì)fy-s03由體系中殘留的厄貝沙坦中間體2-丁基-1,3-二氮雜螺[4,4]壬-1-烯-4-酮（別稱厄貝側(cè)鏈）與亞硝酸根離子（反應(yīng)中使用疊氮化鈉反應(yīng)物是過量的，采用亞硝酸在酸性條件下處理殘留的疊氮化物）反應(yīng)產(chǎn)生，按照ich?m7指導(dǎo)原則計(jì)算厄貝沙坦原料藥中雜質(zhì)fy-s03的可接受限度不得過5ppm。
4、由于厄貝沙坦原料藥中雜質(zhì)fy-s03的可接受限度僅為5ppm，因此常規(guī)的高效液相色譜(hplc)檢驗(yàn)方法的檢測(cè)靈敏度無法達(dá)到要求，靈敏并準(zhǔn)確地檢測(cè)厄貝沙坦原料藥中痕量的雜質(zhì)fy-s03存在技術(shù)難度。目前，還沒有關(guān)于厄貝沙坦中2-丁基-1-亞硝基-1,3-二氮雜螺環(huán)[4.4]壬-2-烯-4-酮檢測(cè)方法的報(bào)道。
5、因此，開發(fā)一種靈敏度高，樣品用量小并且能夠快速準(zhǔn)確檢測(cè)遺傳毒雜質(zhì)fy-s03的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員亟需解決的問題。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種厄貝沙坦中雜質(zhì)的測(cè)定分析方法，通過優(yōu)化高效液相色譜和三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜的條件，使得雜質(zhì)fy-s03的信噪比高，具有靈敏度高、專屬性強(qiáng)，分析快速，抗干擾性強(qiáng)的有益效果。
2、為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，特采用以下技術(shù)方案：
3、(1)分別配制供試品溶液和對(duì)照品溶液；
4、(2)將步驟(1)得到的供試品溶液和對(duì)照品溶液分別注入高效液相色譜-三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜儀進(jìn)行檢測(cè)，并采用外標(biāo)法計(jì)算厄貝沙坦中雜質(zhì)的含量；
5、所述雜質(zhì)為2-丁基-1-亞硝基-1,3-二氮雜螺環(huán)[4.4]壬-2-烯-4-酮，所述雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)式如下所示：
6、。
7、可選的，所述高效液相色譜的測(cè)試條件包括：流動(dòng)相a為0.1%甲酸水，流動(dòng)相b為乙腈，色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流速為0.3~0.5ml/min，進(jìn)樣體積為2~5μl，柱溫為38~42℃。
8、可選的，所述色譜柱為月旭xb?c18。
9、可選的，所述高效液相色譜的檢測(cè)中采用梯度程序進(jìn)行洗脫，所述梯度程序：
10、 時(shí)間（分鐘） 流動(dòng)相a% 流動(dòng)相b% 0 58~62 38~42 13 58~62 38~42 15 10 90 21 10 90 21.01 58~62 38~42 23 58~62 38~42
11、可選的，所述三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜的測(cè)試條件包括：采用電噴霧電離源（ajsesi），監(jiān)測(cè)模式為多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（mrm），干燥氣溫度為290~310℃，氣體流速為3~6l/min。
12、可選的，所述雜質(zhì)的定量限loq為0.10ppm、檢測(cè)限lod為0.05ppm。
13、可選的，所述對(duì)照品溶液的濃度為0.05~5ng/ml。
14、可選的，所述供試品溶液的濃度為0.5～2mg/ml，溶劑為乙腈。
15、綜上所述，本申請(qǐng)包括以下至少一種有益技術(shù)效果：
16、(1)本發(fā)明檢測(cè)方法靈敏度高，樣品用量小，不需要對(duì)樣品進(jìn)行衍生化處理，操作簡(jiǎn)便，其檢測(cè)限(0.05ppm)和定量限(0.10ppm)遠(yuǎn)低于雜質(zhì)fy-s03的限度(5ppm)；
17、(2)本發(fā)明檢測(cè)方法在0.05~5ng/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，線性相關(guān)系數(shù)r約為0.9996；
18、(3)本發(fā)明檢測(cè)方法準(zhǔn)確可行，加樣平均回收率及為104.41%，rsd為5.99%，100%線性溶液連續(xù)進(jìn)樣5針fy-s03峰面積rsd為0.61%；
19、(4)本發(fā)明開發(fā)了一種新的潛在遺傳毒性雜質(zhì)fy-s03檢測(cè)方法，首次實(shí)現(xiàn)了對(duì)厄貝沙坦中fy-s03（2-丁基-1-亞硝基-1,3-二氮雜螺環(huán)[4.4]壬-2-烯-4-酮）的有效控制，保證了患者的用藥安全。
20、
1.一種厄貝沙坦中雜質(zhì)的測(cè)定分析方法，其特征在于，所述檢測(cè)方法包括以下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種厄貝沙坦中雜質(zhì)的測(cè)定分析方法，其特征在于，所述高效液相色譜的測(cè)試條件包括：流動(dòng)相a為0.1%甲酸水，流動(dòng)相b為乙腈，色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流速為0.3~0.5ml/min，進(jìn)樣體積為2~5μl，柱溫為38~42℃。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種厄貝沙坦中雜質(zhì)的測(cè)定分析方法，其特征在于，所述色譜柱為月旭xb?c18。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種厄貝沙坦中雜質(zhì)的測(cè)定分析方法，其特征在于，所述高效液相色譜的檢測(cè)中采用梯度程序進(jìn)行洗脫，所述梯度程序：
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種厄貝沙坦中雜質(zhì)的測(cè)定分析方法，其特征在于，所述三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜的測(cè)試條件包括：采用電噴霧電離源（ajs?esi），監(jiān)測(cè)模式為多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（mrm），干燥氣溫度為290~310℃，氣體流速為3~6l/min。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種厄貝沙坦中雜質(zhì)的測(cè)定分析方法，其特征在于，所述雜質(zhì)的定量限loq為0.10ppm、檢測(cè)限lod為0.05ppm。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種厄貝沙坦中雜質(zhì)的測(cè)定分析方法，其特征在于，所述對(duì)照品溶液的濃度為0.05~5ng/ml。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種厄貝沙坦中雜質(zhì)的測(cè)定分析方法，其特征在于，所述供試品溶液的濃度為0.5～2mg/ml，溶劑為乙腈。