本發明屬于棉花耐旱蛋白檢測，具體涉及一種用于檢測棉花耐旱能力相關的蛋白kat2的單克隆抗體及其應用。
背景技術：
1、universal?stress?protein蛋白(蛋白kat2)是一種催化脂肪酸β氧化的酶。在植物幼苗萌發和生長過程中，參與aba信號傳導，參與茉莉酸在衰老過程中的生物合成。kat2在所有主要aba反應中正調控aba信號，包括aba誘導的對擬南芥種子萌發和萌發后生長的抑制，以及aba誘導的氣孔關閉和氣孔開放的抑制。kat2對aba產生活性氧(ros)起重要作用，表明kat2至少部分通過調節植物細胞ros穩態來調節aba信號。同時kat2可能在一個重要的wrky轉錄抑制物wrky40的下游發揮作用，后者可能將kat2與aba受體abar/chlh介導的信號傳導聯系起來。
2、以往研究發現，在棉花在干旱狀態下，蛋白kat2的表達量與棉花耐旱能力之間具有明確的調控關系，即蛋白kat2的表達量的高低，決定了棉花的耐旱的能力。目前農業種植中，有大量的不同耐旱品種棉花在種植，大部分是自然選育出來的天然耐旱品種。但是目前市面上并沒有專門針對棉花蛋白kat2的抗體，因此在蛋白檢測層面上，對于該研究領域缺乏有效的抗體工具，無法用于棉花廣譜耐旱性的基礎研究，以及廣泛種植的耐旱品種棉花在蛋白層面的檢測。
技術實現思路
1、為了解決上述技術問題，本發明提供了一種用于檢測棉花耐旱能力相關的蛋白kat2的單克隆抗體及其應用。所述的蛋白kat2是表達kat2的全長重組蛋白，蛋白kat2的氨基酸序列為：mekainrqqvllqhlnpsassfsshqnnsalsasaclagdsaayqrtnvfgddvvivaayrtalckskrggfkdtypddllapvlraviektnlnpsevgdivvgtvlapgsqrasecrmaafyagfpetvpvrtvnrqcssglqavadvaaaikagfyeigigaglesmttnpmawegsvnprvkqmeqaqncllpmgitsenvahrfgvtrqeqdqaaveshrkaaaatasgkfkdeivpvatkivdpktgdekpvtisvddgirantsvsdlgklkpvfkkngtttagnssqvsdgagavllmkrsvamrkglpilgvfrtfaavgvdpaimgvgpavaipaavksaglelddvdlfeineafasqfvycqkkleldpqkinvnggamaighplgvtgarcvatllhemkrrgkdcrfgvvsmcigtgmgaaavfergdcvdelcnarkvetnsllskdar，如seq?id?no.1所示。
2、用于檢測棉花耐旱能力相關的蛋白kat2的單克隆抗體，蛋白kat2氨基酸序列如seq?id?no.1所示；以蛋白kat2作為免疫原，免疫小鼠，獲得用于檢測棉花耐旱能力相關的蛋白kat2的單克隆抗體。本發明提供的單克隆抗體靶向檢測蛋白kat2，通過蛋白kat2的表達量高低來判定棉花品種是否耐旱，使得對農業中廣泛種植的不同耐旱品種棉花中的蛋白kat2的表達變化及蛋白網絡圖譜可以實現更深層次研究。
3、本發明提供的一種用于檢測棉花耐旱能力相關的蛋白kat2的單克隆抗體，所述的單克隆抗體包括重鏈可變區和輕鏈可變區；重鏈可變區序列包含seq?id?no.2所示的cdr1-1的氨基酸序列glnikdyy、seq?id?no.3所示的cdr2-1的氨基酸序列idpengnt和seq?idno.4所示的cdr3-1的氨基酸序列nvrwe；輕鏈可變區序列包含seq?id?no.5所示的cdr1-2的氨基酸序列ksvstsgysy、cdr2-2的氨基酸序列lvs和seq?id?no.6所示的cdr3-2的氨基酸序列qhirelt。
4、用于檢測棉花耐旱能力相關的蛋白kat2的單克隆抗體的制備方法，選擇健康的balb/c小鼠，制備蛋白kat2抗原溶液，利用蛋白kat2抗原溶液免疫balb/c小鼠，經過免疫之后，得到淋巴細胞，并利用雜交瘤細胞融合技術制得融合細胞，得到能夠產出的單克隆抗體的細胞株，由該細胞株分泌的單克隆抗體為用于檢測棉花耐旱能力相關的蛋白kat2的單克隆抗體。
5、優選的，用于檢測棉花耐旱能力相關的蛋白kat2的單克隆抗體的制備方法，所述小鼠為8周齡～12周齡balb/c小鼠。
6、優選的，用于檢測棉花耐旱能力相關的蛋白kat2的單克隆抗體的制備方法，所述蛋白kat2抗原溶液是將蛋白kat2溶于生理鹽水中后得到的。
7、優選的，用于檢測棉花耐旱能力相關的蛋白kat2的單克隆抗體的制備方法，取小鼠全脾和淋巴結，與骨髓瘤sp2/0細胞系融合，融合的細胞進行培養，收集上清，選擇免疫原親和力最高的至少60個親代克隆進入亞克隆；通過有限稀釋法和elisa法繼續進行亞克隆及篩選，得到陽性的融合細胞。
8、優選的，用于檢測棉花耐旱能力相關的蛋白kat2的單克隆抗體的制備方法，能夠產出的單克隆抗體的細胞株注射到balb/c小鼠腹部，產生的腹水抗體用proteina/g純化，得到純化的單克隆抗體。
9、本發明提供一種所述的單克隆抗體的應用，所述單克隆抗體用于鑒別耐旱棉花品種和不耐旱棉花品種。
10、優選的，所述的單克隆抗體的應用，通過所述單克隆抗體測試蛋白kat2表達量，通過蛋白kat2表達量來鑒別棉花品種的耐旱性能，進而鑒定區分耐旱棉花品種與不耐旱棉花品種。
11、與現有技術相比，本發明具有以下有益效果：
12、本發明提供的一種用于檢測棉花耐旱能力相關的蛋白kat2的單克隆抗體，對蛋白kat2具有高親和力和高特異性，能廣泛地用于對蛋白kat2的檢測，特別可用于檢測農業中廣泛種植各品種耐旱棉花的蛋白kat2的表達情況。
13、本發明的單克隆抗體提供了一個靶向蛋白kat2研究的工具，使得對不同耐旱品種棉花中蛋白kat2的表達與最終棉花能否有效耐旱的形成之間的調控關系能夠有效地研究。
1.用于檢測棉花耐旱能力相關的蛋白kat2的單克隆抗體，其特征在于，蛋白kat2的氨基酸序列如seq?id?no.1所示；以蛋白kat2作為免疫原，免疫小鼠，獲得用于檢測棉花耐旱能力相關的蛋白kat2的單克隆抗體。
2.根據權利要求1所述的用于檢測棉花耐旱能力相關的蛋白kat2的單克隆抗體，其特征在于，所述的單克隆抗體包括重鏈可變區和輕鏈可變區；重鏈可變區序列包含cdr1-1的氨基酸序列glnikdyy、cdr2-1的氨基酸序列idpengnt和cdr3-1的氨基酸序列nvrwe；輕鏈可變區序列包含cdr1-2的氨基酸序列ksvstsgysy、cdr2-2的氨基酸序列lvs和cdr3-2的氨基酸序列qhirelt。
3.根據權利要求1所述的用于檢測棉花耐旱能力相關的蛋白kat2的單克隆抗體的制備方法，其特征在于，制備蛋白kat2抗原溶液，利用蛋白kat2抗原溶液免疫健康的balb/c小鼠，經過免疫之后，得到淋巴細胞，并利用雜交瘤細胞融合技術制得融合細胞，得到能夠產出的單克隆抗體的細胞株，由該細胞株分泌的單克隆抗體為用于檢測棉花耐旱能力相關的蛋白kat2的單克隆抗體。
4.根據權利要求3所述的用于檢測棉花耐旱能力相關的蛋白kat2的單克隆抗體的制備方法，其特征在于，所述小鼠為8周齡～12周齡balb/c小鼠。
5.根據權利要求3所述的用于檢測棉花耐旱能力相關的蛋白kat2的單克隆抗體的制備方法，其特征在于，所述蛋白kat2抗原溶液是將蛋白kat2溶于生理鹽水中后得到的。
6.根據權利要求3所述的用于檢測棉花耐旱能力相關的蛋白kat2的單克隆抗體的制備方法，其特征在于，蛋白kat2抗原溶液的濃度為1mg/ml～5mg/ml。
7.根據權利要求3所述的用于檢測棉花耐旱能力相關的蛋白kat2的單克隆抗體的制備方法，其特征在于，細胞株注射到balb/c小鼠腹部，產生的腹水抗體用proteina/g純化，得到純化的單克隆抗體。
8.根據權利要求1所述的單克隆抗體的應用，其特征在于，所述單克隆抗體用于鑒別耐旱棉花品種和不耐旱棉花品種。
9.根據權利要求8所述的單克隆抗體的應用，其特征在于，通過所述單克隆抗體測試蛋白kat2表達量，通過蛋白kat2表達量來鑒別棉花品種的耐旱性能。
10.一種檢測試劑盒，其特征在于，包括權利要求1所述的用于檢測棉花耐旱能力相關的蛋白kat2的單克隆抗體。