專利名稱：固定化腸膜狀明串珠菌生產粗右旋糖酐的方法
技術領域：
本發明涉及一種固定化腸膜狀明串珠菌生產粗右旋糖酐的方法。
技術背景右旋糖酐是一種經微生物發酵產生的多糖，作為一種抗休克和改 善人體微循環的藥物己在臨床得到了廣泛的應用，是目前公認的優良血漿代用 品，同時又可作為添加劑應用于輕工、食品、化工等領域。
目前工業上都是采用游離細胞一腸膜狀明串珠菌進行發酵生產右旋糖酐， 經水解、劃分、干燥等工序，最后形成小分子、中分子和低分子產品。它存在 生產成本高、菌體活性不高等問題
發明內容
本發明的目的是提供一種生產成本低、菌體活性高的固定化腸膜 狀明串珠菌生產右旋糖酐的方法。
本發明固定化腸膜狀明串珠菌生產粗右旋糖酐的方法包括下列步驟-
a) 、混合取濃度為8%的聚乙烯醇復合凝膠90mL，在室溫下與6 15ml的 腸膜狀明串珠菌菌液混合，攪拌均勻，倒入平皿中，厚度為4 10mm;
b) 、冷凍、切塊 在-24。C的條件下冷凍48小時，待成型后取出自然解 凍，切成8mmX8mmX8mm的小塊；
c) 、發酵生產 按照重量百分含量為8% 15%的載體添加量將固定化腸 膜狀明串珠菌加入到生產培養基中，在25t:條件下進行粗右旋糖酐發酵生產。
固定化腸膜狀明串珠菌載體添加量為10。％。
本發明采用固定化細胞技術對腸膜狀明串珠菌進行固定化后，利用固定化 增殖細胞可直接進行右旋糖酐的發酵生產，不但可減少操作工序，有效的提高 菌體活性，還可在一定程度上降低生產成本。
具體實施例方式
下面的實施例可以使本專業技術人員更全面地理解本發明，但不以任何方 式限制本發明。
實施例1 固定化細胞的載體——聚乙烯醇(PVA)復合凝膠的合成方法 如下將9克聚乙烯醇緩慢溶解到100毫升85'C 95'C的熱水中，邊加邊攪拌， 待聚乙烯醇完全溶解后，加入4毫升的丙三醇，攪拌均勻，然后在不斷攪拌的 同時加入已溶解好的1克的硼砂(用1:1的熱水溶解)，邊加邊攪拌，進行凝膠化處理，交聯時間為2 15分鐘，然后緩慢地加入1克的順丁烯二酸酐(用l:l 的熱水溶解)，不斷攪拌，直至凝膠溶液中無絮狀凝固物為止，所得透明、略帶 乳白色的粘稠溶膠，即為聚乙烯醇復合凝膠。
取濃度為8%的聚乙烯醇復合凝膠90mL，在室溫下與10mL腸膜狀明串珠菌 菌液混合，攪拌均勻，倒入平皿中，厚度為4 10mm，在-24。C的條件下冷凍48 小時，待成型后取出自然解凍，切成8ramX8mmX8mm的小塊。
按照10%的載體添加量將固定化腸膜狀明串珠菌加入到生產培養基中，在 25 °C條件下進行右旋糖酐發酵生產。
粗右旋糖酐含量測定取100mL發酵液，加入適量95% (V/V)的乙醇，進 行沉淀，用手捏洗干凈后，稱濕重。
結果顯示粗右旋糖酐小樣14. 3g/100mL。
實施例2 重復實施例l，有以下不同點按照8%的載體添加量將固定 化腸膜狀明串珠菌加入到生產培養基中，在25'C條件下進行右旋糖酐發酵生產。 在實施例l中同樣條件下測定，結果顯示載體添加量為8%時，粗右旋糖酐小 樣較實施例l試驗低。
實施例3 重復實施例1，有以下不同點按照12%的載體添加量將固定 化腸膜狀明串珠菌加入到生產培養基中，在25"C條件下進行右旋糖酐發酵生產。 在實施例1中同樣條件下測定，結果顯示載體添加量為12%時，粗右旋糖酐 小樣收率與實施例l試驗相當。
實施例4 重復實施例1，有以下不同點按照15%的載體添加量將固定 化腸膜狀明串珠菌加入到生產培養基中，在25t:條件下進行右旋糖酐發酵生產。 在實施例1中同樣條件下測定，結果顯示載體添加量為15%時，粗右旋糖酐
小樣收率與實施例l試驗相當。
對比例A 重復實施例1，有以下不同點用濃度為8%聚乙烯醇復合凝膠 50mL與6mL、 10mL和15mL的腸膜狀明串珠菌菌液混合。在實施例1中同樣條件 下測定，結果顯示包埋量為6mL的固定化腸膜狀明串珠菌的粗右旋糖酐小樣 較實施例1試驗低，10mL和15mL固定化腸膜狀明串珠菌的粗右旋糖酐小樣較實 施例l試驗高。
通過本發明實施例與對比例的比較，說明利用聚乙烯醇復合凝膠固定化腸 膜狀明串珠菌有較好的機械性能、操作穩定性和工業應用前景。
權利要求
1. 一種固定化腸膜狀明串珠菌生產粗右旋糖酐的方法，其特征在于它包括下列步驟a)、混合取濃度為8％的聚乙烯醇復合凝膠90mL，在室溫下與6～15ml的腸膜狀明串珠菌菌液混合，攪拌均勻，倒入平皿中，厚度為4～10mm；b)、冷凍、切塊 在-24℃的條件下冷凍48小時，待成型后取出自然解凍，切成8mm×8mm×8mm的小塊；c)、發酵生產 按照重量百分含量為8％～15％的載體添加量將固定化腸膜狀明串珠菌加入到生產培養基中，在25℃條件下進行粗右旋糖酐發酵生產。
2. 按照權利要求1所述的固定化腸膜狀明串珠菌生產粗右旋糖酐的方法， 其特征在于其中固定化腸膜狀明串珠菌載體添加量為10%。
全文摘要
本發明公開了一種生產成本低、菌體活性高的固定化腸膜狀明串珠菌生產右旋糖酐的方法。它包括下列步驟a)混合，取濃度為8％的聚乙烯醇復合凝膠90mL，在室溫下與6～15ml的腸膜狀明串珠菌菌液混合，攪拌均勻，倒入平皿中，厚度為4～10mm；b)冷凍、切塊，在-24℃的條件下冷凍48小時，待成型后取出自然解凍，切成8mm×8mm×8mm的小塊；c)發酵生產，按照重量百分含量為8％～15％的載體添加量將固定化腸膜狀明串珠菌加入到生產培養基中，在25℃條件下進行粗右旋糖酐發酵生產。本發明采用固定化細胞技術對腸膜狀明串珠菌進行固定化后，利用固定化增殖細胞可直接進行右旋糖酐的發酵生產，不但可減少操作工序，有效的提高菌體活性，還可在一定程度上降低生產成本。
文檔編號C12P19/00GK101205551SQ20071010933
公開日2008年6月25日 申請日期2007年5月23日 優先權日2006年12月19日
發明者周劍平, 王治業, 魏甲乾 申請人:甘肅省科學院生物研究所