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一種肝毛細線蟲寄生蟲感染布什田鼠模型及其構建方法與應用

文檔序號:42296153發布日期:2025-06-27 18:33閱讀:9來源:國知局

本發明涉及生物醫學領域,具體涉及一種肝毛細線蟲寄生蟲感染布什田鼠模型及其構建方法與應用。


背景技術:

1、寄生蟲介導的生殖成本理論揭示了生殖與免疫系統間的資源分配權衡是調節宿主生存繁殖策略的核心機制。雖然該現象在個體水平已獲廣泛驗證,但其群體生態效應及調控機制尚未明晰。現有關于肝毛細線蟲感染布什田鼠的研究存在顯著局限:通過自然感染囊蚴構建的動物模型雖能實現病原定殖,但無法有效反映寄生蟲對宿主種群動態的真實影響,其調控作用常被環境因子干擾所掩蓋。


技術實現思路

1、為解決上述問題,本發明提供了一種肝毛細線蟲寄生蟲感染布什田鼠模型及其構建方法與應用,該模型可有效解耦混雜因素,揭示寄生蟲感染對宿主種群波動的調控規律,為闡明病原體-宿主互作的生態進化機制提供新型研究平臺。

2、為實現上述目的,本發明采取的技術方案為:

3、一種肝毛細線蟲寄生蟲感染布什田鼠模型的構建方法,包括以下步驟:

4、s1、從自然感染的布什田鼠肝臟中通過人工消化法分離收集肝毛細線蟲蟲卵;具體的:

5、a.組織預處理階段:將感染肝臟組織在4℃生理鹽水中精細剪碎,與含1%(w/v)胃蛋白酶、0.7%(v/v)鹽酸及0.9%(w/v)氯化鈉的人工胃液按1:10(w/v)比例混合;

6、b.酶解分離階段:在42±0.5℃恒溫搖床中以120rpm振蕩消化5±0.5小時;

7、c.純化階段:經100目篩網去除較大的殘余肝組織,濾液自然沉淀30min,離心洗滌,剩下的沉渣分裝在1.5ml的ep管中,1500×g梯度離心3次,每次5min,棄去上清,再用蒸餾水反復洗滌2至3次,直至澄清,獲得高純度蟲卵懸液。

8、s2、將獲得的肝毛細線蟲蟲卵置于含1%甲醛的濾紙培養體系中,在30℃恒溫條件下培養至感染期蟲卵;

9、s3、通過灌胃途徑將感染期蟲卵接種至實驗動物體內,接種劑量為每只動物500~1500個蟲卵。

10、進一步地,所述的實驗動物的篩選標準為:健康雄性布什田鼠,6~8周齡,體重30±5g,單籠適應性飼養1周。

11、本發明還提供了一種肝毛細線蟲寄生蟲感染布什田鼠模型,該模型通過上述的肝毛細線蟲寄生蟲感染布什田鼠模型的構建方法構建,可用于揭示寄生蟲感染條件下宿主免疫-生殖互作機制。

12、具體的,本發明所述的一種肝毛細線蟲寄生蟲感染布什田鼠模型可用于系統監測體液免疫指標:采用elisa法動態檢測血清igg效價及th1/th2型細胞因子il-6、il-10表達譜。

13、本發明所述的一種肝毛細線蟲寄生蟲感染布什田鼠模型可用于神經內分泌調控機制解析:通過qpcr和放射免疫法檢測hpg軸關鍵節點gnrh、fsh、lh表達水平及睪酮合成動力學。

14、本發明所述的一種肝毛細線蟲寄生蟲感染布什田鼠模型可用于營養干預策略評估:建立視黃醇梯度補充模型(0-5000iu/kg),通過組織病理學和流式細胞術評價其對生殖上皮細胞再生及t淋巴細胞亞群平衡的調控效應。

15、本發明通過口服感染可以精準控制寄生蟲載量,進而可以得到不同寄生蟲載量的肝毛細線蟲寄生蟲感染布什田鼠模型,該模型可用于研究肝毛細線蟲致病機理、評估抗寄生蟲藥物及免疫調節劑的療效,具有重要的科研與臨床應用價值。并且通過該模型可以重點研究對其繁殖和免疫系統的調控機制。且該模型具有操作簡便、重復性好、實驗結果可靠等優點,為肝毛細線蟲感染的病理機制研究提供了重要的實驗工具。



技術特征:

1.一種肝毛細線蟲寄生蟲感染布什田鼠模型的構建方法,其特征在于,包括以下步驟:

2.如權利要求1所述的一種肝毛細線蟲寄生蟲感染布什田鼠模型的構建方法,其特征在于,所述的步驟s1通過人工消化法分離收集肝毛細線蟲蟲卵,包括如下步驟:

3.如權利要求1所述的一種肝毛細線蟲寄生蟲感染布什田鼠模型的構建方法,其特征在于,所述的實驗動物的篩選標準為:健康雄性布什田鼠,6~8周齡,體重30±5g,單籠適應性飼養1周。

4.一種肝毛細線蟲寄生蟲感染布什田鼠模型,其特征在于,采用如權利要求1~3任一項所述的肝毛細線蟲寄生蟲感染布什田鼠模型的構建方法構建。

5.如權利要求4所述的一種肝毛細線蟲寄生蟲感染布什田鼠模型的應用,其特征在于:用于揭示寄生蟲感染條件下宿主免疫-生殖互作機制。

6.如權利要求5所述的一種肝毛細線蟲寄生蟲感染布什田鼠模型的應用,其特征在于:用于系統監測體液免疫指標:采用elisa法動態檢測血清igg效價及th1/th2型細胞因子il-6、il-10表達譜。

7.如權利要求5所述的一種肝毛細線蟲寄生蟲感染布什田鼠模型的應用,其特征在于:用于神經內分泌調控機制解析:通過qpcr和放射免疫法檢測hpg軸關鍵節點gnrh、fsh、lh表達水平及睪酮合成動力學。

8.如權利要求5所述的一種肝毛細線蟲寄生蟲感染布什田鼠模型的應用,其特征在于:用于營養干預策略評估:建立視黃醇梯度補充模型(0-5000iu/kg),通過組織病理學和流式細胞術評價其對生殖上皮細胞再生及t淋巴細胞亞群平衡的調控效應。


技術總結
本發明涉及生物醫學領域,具體涉及一種肝毛細線蟲寄生蟲感染布什田鼠模型及其構建方法與應用,該模型構建時,包括以下步驟:從自然感染的布什田鼠肝臟中分離收集肝毛細線蟲蟲卵;將獲得的肝毛細線蟲蟲卵置于含1%甲醛的濾紙培養體系中,在30℃恒溫條件下培養至感染期蟲卵;通過灌胃途徑將感染期蟲卵接種至實驗動物體內,接種劑量為每只動物500~1500個蟲卵。本發明通過口服感染可以精準控制寄生蟲載量,進而可以得到不同寄生蟲載量的肝毛細線蟲寄生蟲感染布什田鼠模型,該模型可用于研究肝毛細線蟲致病機理、評估抗寄生蟲藥物及免疫調節劑的療效,具有重要的科研與臨床應用價值。

技術研發人員:胡斌,何宏軒,楊如倩,劉長忠,葛瑨,王嘉敏,張代寶,張守平,周登元,王強強
受保護的技術使用者:河南科技學院
技術研發日:
技術公布日:2025/6/26
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