本發明屬于腫瘤分子生物學，具體涉及抑制或檢測外泌體mir-3150a-5p表達試劑的應用以及鼻咽癌轉移治療藥物和預后制劑。

背景技術：

1、鼻咽癌（nasopharyngeal?carcinoma，npc）發生于鼻咽粘膜上皮，是頭頸部最為常見的惡性腫瘤。npc?的發病因素涉及遺傳、環境和生活方式等多方面，包括eb?病毒感染、吸煙、飲酒、遺傳因素、飲食習慣以及某些化學物質和放射線等。

2、世界衛生組織將npc?定義為三種類型：角化性、非角化性鱗狀細胞癌和未分化或低分化癌。其中，非角化亞型鼻咽癌占流行地區腫瘤的95%以上。由于病變早期癥狀不明顯，且npc?具有高度侵襲性和高轉移潛能，70%以上的患者初診即發現淋巴結轉移，約20-30%的患者發生遠處轉移，主要包括肺、肝、骨等。盡管放療聯合化療能有效地控制局部病灶、降低死亡率以及提高5?年總生存率，但發生遠處轉移患者的治療效果仍然不理想，遠處轉移仍是目前臨床治療失敗的主要原因。

3、外泌體是幾乎所有哺乳動物細胞都會分泌的杯狀雙層膜小囊泡，在血液等體液內傳播，可以通過直接與細胞外基質相互作用，直接被釋放到生物體液中，將內容物傳遞至受體細胞中影響其生物功能。腫瘤外泌體攜帶來源于腫瘤細胞的生物學信息（蛋白、dna和microrna等），其內容物的濃度與腫瘤細胞的侵襲能力及腫瘤微環境相關，通過分析外泌體的表面標記或內部成分可以直接獲得細胞的基本信息。由于外泌體有脂質膜保護，其內容物不易被降解破壞,使得無論新鮮的還是長期保存的樣本皆可用于分析。mirna存在于外泌體內容物中，可以通過外泌體的包裹從腫瘤細胞釋放到體液中，不會受到核糖體酶的降解。更重要的是，外泌體可以從眾多體液中獲得(血液、尿液等)，這使得外泌體檢測在腫瘤診療中極具前途，成為一種較為理想的“液體活檢”方法。

4、因此，迫切需要開發新的可靠的非侵入性早期轉移診斷預后標記物，促進鼻咽癌的早期精準干預和治療，延長鼻咽癌患者的生存期。專利申請cn118086492a公開了mir-376a-5p在鼻咽癌患者血液中的表達水平顯著高于健康人群，可作為鼻咽癌診斷的mi?rna標志物以及治療靶標。本發明不僅僅是開發了一種新的鼻咽癌診斷預后標記物mir-3150a-5p，且來源為外泌體，不同于該專利申請的血液來源的標記物。

技術實現思路

1、針對現有技術所存在的問題，本發明提供了抑制或檢測外泌體mir-3150a-5p表達試劑的應用以及鼻咽癌轉移治療藥物和預后制劑。本發明是通過外泌體mir-3150a-5p作為預測鼻咽癌轉移風險的標志物，通過分析其表達量即可快速實現鼻咽癌的輔助預后檢測。且mir-3150a-5p可作為治療靶點，靶向抑制其表達可實現鼻咽癌患者的治療，具有較廣的應用前景。

2、本發明所述mir-3150a-5p的核苷酸序列為caaccucgacgaucuccucagc。

3、本發明的目的之一是提供抑制外泌體mir-3150a-5p表達試劑的應用，用于制備鼻咽癌治療藥物。

4、進一步地，

5、所述的抑制外泌體mir-3150a-5p表達試劑包括mir-3150a-5p?inhibitior。

6、更進一步地，

7、mir-3150a-5p?inhibitior序列為gcugaggagaucgucgagguug。

8、本發明的目的之二是提供一種鼻咽癌轉移治療藥物，包括抑制外泌體mir-3150a-5p表達的試劑。

9、進一步地，

10、所述的抑制外泌體mir-3150a-5p表達試劑包括mir-3150a-5p?inhibitior。

11、更進一步地，

12、mir-3150a-5p?inhibitior序列為gcugaggagaucgucgagguug。

13、本發明的目的之三是提供檢測外泌體mir-3150a-5p表達試劑的應用，用于制備鼻咽癌轉移預后制劑。通過檢測外泌體mir-3150a-5p在鼻咽癌患者中的表達水平以輔助診斷和/或評估鼻咽癌早期轉移風險。

14、進一步地，

15、所述的檢測外泌體mir-3150a-5p表達的試劑，包括pcr檢測試劑。

16、更進一步地，

17、所述的pcr檢測試劑中的擴增引物序列：上游引物為ccaacctcgacgatctcctcagc，下游引物為cagtctcagggtccgaggtattc。

18、優選地，所述檢測樣本為血清外泌體。

19、本發明的目的之四是提供一種鼻咽癌轉移預后制劑，包括檢測外泌體mir-3150a-5p表達試劑。

20、所述的檢測外泌體mir-3150a-5p表達試劑包括pcr檢測試劑。

21、更進一步地，

22、所述的pcr檢測試劑中的擴增引物序列：上游引物為ccaacctcgacgatctcctcagc，下游引物為cagtctcagggtccgaggtattc。

23、優選地，所述檢測樣本為血清外泌體。

24、本發明通過臨床血清外泌體mirna測序和tcga數據庫分析，發現mir-3150a-5p在鼻咽癌轉移患者中的表達顯著高于未轉移患者，其可以作為預測鼻咽癌轉移風險和不良預后的可靠標志物。

25、本發明通過特異性擴增mir-3150a-5p的試劑盒和血清樣本檢測，實現鼻咽癌早期轉移的快速輔助診斷，且經計算分析auc曲線下面積達0.84，靈敏度78%，特異度83%。

26、本發明設計了基于mir-3150a-5p的抑制劑序列（gcugaggagaucgucgagguug），發現靶向敲低該mirna能夠顯著抑制鼻咽癌細胞增殖、遷移和侵襲能力，表明其具有開發為治療鼻咽癌藥物的潛力。

27、檢測血清外泌體中mir-3150a-5p表達水平，用于鼻咽癌轉移的輔助診斷和風險預測。基于該mirna的引物設計、試劑盒開發及其在臨床診斷中的具體應用。通過mir-3150a-5p的特異性抑制劑序列，抑制其表達以治療鼻咽癌。包含使用mirna?inhibitor或其他載體（如核酸藥物、生物活性片段）的藥物開發和治療應用。

28、本發明可能的變更設計方向或者變形方案：

29、(一)多mirna聯合檢測

30、可能會以mir-3150a-5p與其他mirna的組合（如多標志物聯合檢測）取代單一mirna的診斷功能，以提升靈敏度和特異度。

31、(二)樣本來源改進

32、本發明基于血清外泌體樣本檢測，可能的變形包括利用其他生物樣本如唾液、尿液、組織活檢、血漿作為檢測來源，以實現非侵入式或多樣化的診斷方案。

33、(三)替代抑制劑設計

34、本發明利用mir-3150a-5p?inhibitor序列抑制該mirna，還可能設計小分子化合物、反義寡核苷酸（aso）、sirna等其他形式的mirna抑制劑。

35、本發明有益效果

36、本發明的優點如下：本發明發現mir-3150a-5p在鼻咽癌轉移患者血清外泌體中的表達水平顯著高于未轉移患者，且經計算分析auc曲線下面積為0.84，mir-3150a-5p的診斷靈敏度可達到78％，特異度可達83％。證實mir-3150a-5p基因在鼻咽癌患者診斷預后中具備良好的應用前景。另外，發現敲低mir-3150a-5p會顯著抑制鼻咽癌細胞及其分泌的外泌體中mir-3150a-5p的表達量且能有效抑制鼻咽癌細胞轉移等惡性進展。上述發現表明mir-3150a-5p對鼻咽癌的重要性，并提示采用mirna?inhibitor靶向敲低mir-3150a-5p進行鼻咽癌治療的可行性。